内皮源性27nt-miRNA对血管平滑肌细胞表型转换、增殖与凋亡的影响及相关机制研究
发布时间：2021-10-30 09:59
目的1研究内皮源性27nt-mi RNA对主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）表型转换及其相关分子机制。2探讨内皮源性27nt-mi RNA对主动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移及凋亡等细胞功能的影响。方法1慢病毒构建、转染及VSMCs去分化模型的建立慢病毒由上海吉凯基因化学技术有限公司根据相应的mi RNA序列设计、构建,经PCR鉴定及DNA测序比对分析确定载体构建成功后用慢病毒包装载体形成27nt-mi RNA高表达、anti-27nt-mi RNA及阴性对照NC慢病毒液。将慢病毒分别转染VSMCs后,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光表达情况以确定27nt-mi RNA细胞株建立情况。2检测27nt-mi RNA对VSMCs表型转换的影响根据实验设计要求,将VSMCs随机分五组:分别为正常对照组（normal）、PDGF-BB组、mimic 27nt-mi RNA+PDGF-BB组、Anti-27nt-mi RNA+PDGF-BB组、NC+PDGF-BB组。正常对照组的VSMCs不给予任何处理、PDGF-BB组的VSMCs用10 ng/...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒载体结构图
方法SS 17.0 统计软件。计量资料以 X±S 表示，两两比，多组间比较采用单因素方差分析，进一步比较用.05 为差异有统计学意义。体外生长状况条件下 VSMCs 呈长梭形或多角形，少部分形态为，胞浆丰富，胞质密度高，核呈卵圆形居中。刚复而且生长速度较为缓慢，大约有 50% 的细胞贴壁随着生长环境慢慢的改善，细胞的生长速度变快，排列成束，部分重叠，出现典型的“谷峰状”生长（如
2019 届硕士学位论文 内皮源性 27nt-miRNA 对 VSMCs 表型转换、增殖与凋亡的影响及相关机制研究3.2 慢病毒感染条件确定检测 NC 慢病毒不同病毒滴度（MOI=30、50、70、80）感染 VSMCs后荧光表达强度确定感染条件，结果显示随着 MOI 值增加，细胞胞浆绿色荧光表达逐渐增强。MOI 为 30 时，极少量的细胞有微弱绿色荧光，MOI为 50 时，绿色荧光增强。当 MOI 为 80 时，细胞具有明显可见的绿色荧光，感染效率可达 90% 左右，且细胞的生长状态良好（见图 1-3），说明 MOI=80 为 VSMCs 慢病毒感染的最佳实验条件，可得到最佳转染效率且不影响细胞生长活性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MiR-92a通过靶向抑制PTEN的表达促进血管平滑肌细胞的增殖以及迁移[J]. 赵曦雯,张玉梅. 成都医学院学报. 2019(02)
[2]在神经系统中TRPC1的研究进展[J]. 崔媛媛,史娟. 生理科学进展. 2017(06)
[3]27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS表达/活性的调节及其代谢产物的影响[J]. 罗雪兰,陈伟,莫国君,杨鹏,欧和生. 现代生物医学进展. 2017(08)
[4]miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及机制[J]. 杨云山. 国际检验医学杂志. 2017(01)
[5]血管平滑肌细胞表型转化的影响因素及相关血管疾病[J]. 孟立平,郭航远,季政. 中国心血管杂志. 2015(05)
[6]miRNA对血管内皮细胞功能调节的研究进展[J]. 李玉媚,欧和生. 中国动脉硬化杂志. 2014(10)
[7]内含子源性miRNA通过转录因子AP1调节内皮型一氧化氮合酶表达及血管内皮细胞增殖作用[J]. 李玉媚,王辉,张文宇,陈伟,胡楠,欧和生. 中国动脉硬化杂志. 2014(07)
[8]微小RNA与高血压的研究进展[J]. 侯良磊,杨德业. 国际心血管病杂志. 2014(01)
[9]微小RNA对心血管系统发育、功能和高血压的调节作用（待续）[J]. CHEN Jing-hai,WANG Da-zhi,张玲玉,谢良地. 中华高血压杂志. 2013(01)
[10]血管平滑肌细胞的增殖因素及机制[J]. 王智昊,吴扬,王英凯. 吉林大学学报(医学版). 2011(03)
博士论文
[1]PDCD4调控miR-184靶向C-MYC和BCL-2抑制鼻咽癌细胞增殖和促进凋亡[D]. 甄艳.南方医科大学 2013
硕士论文
[1]27nt miRNA对eNOS调节及HUVECs增殖相关因子AP-1作用机制研究[D]. 李玉媚.广西医科大学 2015
本文编号：3466527
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒载体结构图
方法SS 17.0 统计软件。计量资料以 X±S 表示，两两比，多组间比较采用单因素方差分析，进一步比较用.05 为差异有统计学意义。体外生长状况条件下 VSMCs 呈长梭形或多角形，少部分形态为，胞浆丰富，胞质密度高，核呈卵圆形居中。刚复而且生长速度较为缓慢，大约有 50% 的细胞贴壁随着生长环境慢慢的改善，细胞的生长速度变快，排列成束，部分重叠，出现典型的“谷峰状”生长（如
2019 届硕士学位论文 内皮源性 27nt-miRNA 对 VSMCs 表型转换、增殖与凋亡的影响及相关机制研究3.2 慢病毒感染条件确定检测 NC 慢病毒不同病毒滴度（MOI=30、50、70、80）感染 VSMCs后荧光表达强度确定感染条件，结果显示随着 MOI 值增加，细胞胞浆绿色荧光表达逐渐增强。MOI 为 30 时，极少量的细胞有微弱绿色荧光，MOI为 50 时，绿色荧光增强。当 MOI 为 80 时，细胞具有明显可见的绿色荧光，感染效率可达 90% 左右，且细胞的生长状态良好（见图 1-3），说明 MOI=80 为 VSMCs 慢病毒感染的最佳实验条件，可得到最佳转染效率且不影响细胞生长活性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MiR-92a通过靶向抑制PTEN的表达促进血管平滑肌细胞的增殖以及迁移[J]. 赵曦雯,张玉梅. 成都医学院学报. 2019(02)
[2]在神经系统中TRPC1的研究进展[J]. 崔媛媛,史娟. 生理科学进展. 2017(06)
[3]27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS表达/活性的调节及其代谢产物的影响[J]. 罗雪兰,陈伟,莫国君,杨鹏,欧和生. 现代生物医学进展. 2017(08)
[4]miRNA-146a调控血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及机制[J]. 杨云山. 国际检验医学杂志. 2017(01)
[5]血管平滑肌细胞表型转化的影响因素及相关血管疾病[J]. 孟立平,郭航远,季政. 中国心血管杂志. 2015(05)
[6]miRNA对血管内皮细胞功能调节的研究进展[J]. 李玉媚,欧和生. 中国动脉硬化杂志. 2014(10)
[7]内含子源性miRNA通过转录因子AP1调节内皮型一氧化氮合酶表达及血管内皮细胞增殖作用[J]. 李玉媚,王辉,张文宇,陈伟,胡楠,欧和生. 中国动脉硬化杂志. 2014(07)
[8]微小RNA与高血压的研究进展[J]. 侯良磊,杨德业. 国际心血管病杂志. 2014(01)
[9]微小RNA对心血管系统发育、功能和高血压的调节作用（待续）[J]. CHEN Jing-hai,WANG Da-zhi,张玲玉,谢良地. 中华高血压杂志. 2013(01)
[10]血管平滑肌细胞的增殖因素及机制[J]. 王智昊,吴扬,王英凯. 吉林大学学报(医学版). 2011(03)
博士论文
[1]PDCD4调控miR-184靶向C-MYC和BCL-2抑制鼻咽癌细胞增殖和促进凋亡[D]. 甄艳.南方医科大学 2013
硕士论文
[1]27nt miRNA对eNOS调节及HUVECs增殖相关因子AP-1作用机制研究[D]. 李玉媚.广西医科大学 2015
本文编号：3466527
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