重组酶介导的等温核酸扩增技术检测多房棘球绦虫方法的建立及初步应用

发布时间：2021-11-11 18:35

　　目的基于重组酶介导的等温扩增技术（Recombinase-aided isothermal amplification assay,RAA）建立一种快速检测多房棘球绦虫的核酸检测方法,并进行检测效果评价。方法以多房棘球绦虫线粒体基因序列（GenBank登录号:AB018440）作为靶序列,根据RAA反应原理设计并合成引物,利用该引物进行RAA扩增。以聚合酶链反应（PCR）作为平行对照,应用RAA方法扩增不同稀释浓度的多房棘球绦虫基因组DNA及梯度稀释的含不同拷贝数目的基因片段的pMD19-T（Simple）克隆质粒,以评价RAA检测的敏感性。应用此方法检测细粒棘球绦虫（G1型）、牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第虫、肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA,以评价其特异性。在对建立的方法进行条件优化后,检测9份感染多房棘球蚴的动物组织样本、3份模拟现场多房棘球蚴感染阳性犬粪样本以及2份现场阳性犬粪样本,以验证所建立的RAA方法的可靠性和实用性。结果所建立的RAA法可在40 min内特异性扩增多房棘球绦虫目的基因片段。以多房... 

【文章来源】：中国血吸虫病防治杂志. 2020,32(02)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

多房棘球蚴包囊基因组DNA扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果

不同RAA反应时间扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果

以多房棘球绦虫基因组DNA为模板的RAA法检测敏感性

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3489319