Notch1信号通路激活在低氧诱导人脐静脉内皮细胞血管形成中的作用
发布时间：2021-11-18 06:51
目的观察低氧条件下HIF-1α/VEGF/Notch信号通路在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成中的作用。方法将HUVEC进行常氧和低氧[二氯化钴 （CoCl2）,200 μmol/L]诱导,再将常氧和低氧处理的HUVEC应用Notch1信号通路的抑制剂DAPT （30 μmol/L,24 h）和激活剂JAG-1 （30 μmol/L,24 h）干预。通过体外小管形成实验观察低氧对HUVEC血管生成能力的影响。应用RT-PCR和Western blot检测HUVEC中低氧诱导因子-1α （HIF-1α）、血管内皮生长因子 （VEGF）、基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和Notch1信号分子 （Notch1、Dell4和JAG-1）的mRNA和蛋白表达。通过Transwell迁移实验和伤口愈合实验观察低氧、DAPT、JAG-1对HUVEC迁移能力的影响。应用MTT法检测低氧及Notch1对HUVEC增殖的影响。两组间比较采用t检验,采用析因设计方差分析低氧和DAPT以及低氧和JAG-1对HUVEC迁移能力、距离、小管形成能力和细胞增殖的交互作用。结果与常氧组比较,低氧组小管总长[（...
【文章来源】：中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2020,10(03)
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
倒置相差显微镜下观察不同组0和24 h HUVEC细胞伤口愈合 (×100)
表6 低氧及DAPT、JAG-1对HUVEC小管总长的影响(mm,) 低氧 DAPT 平均 JAG-1 平均 否 是 否 是 否 5.52±0.87 4.13±0.57 4.83±0.92 5.52±0.36 14.62±1.28 10.07±5.62 是 15.4 ±1.24 7.42±0.70 11.41±4.96 15.4 ±1.11 17.32±1.63 16.36±2.27 平均 10.46±5.53 5.78±2.04 8.12±6.53 10.46±5.22 15.97±3.12 13.22±7.46讨 论
用Trizol试剂根据生产厂商的说明从HUVEC中提取总RNA。使用M-MLV Reverse Transcriptase试剂盒将总RNA (1 μg)反转录成cDNA。引物序列如表1所示。使用SYBR Green Real-time PCR Master Mix (QPK-201)在Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪上进行RT-PCR。反应体系为20 μL,其中包括1 μL引物、10 μL MixSYBR、1 μL cDNA和6 μL H2O。反应条件如下:95 ℃ 5 min,95 ℃ 10 s,65 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,40个循环。GAPDH作为内参基因。使用2-△△Ct方法进行mRNA相对表达量的计算。实验重复3次。表1 引物序列信息 名称 序列(5＇→3＇) 预期扩增长度(bp) Notch1 上游GGC CGT GTA AGT GTG GTC AGA GC 168 下游 CCT CAG CGT TCG TTT GTA CTG A Dell4 上游CTT GGA GCA GCG CTG GAG TAC 69 下游CCG CTG CAC ACT TCT TGG TCC JAG-1 上游TCT GGG AGT CCC ATG GAA GC 73 下游TAG CAG TGC CCC TAG CTG CCA 低氧诱导因子1α 上游GGT ACG TTC GTT TGC ATG TCG AGC 222 下游CCT CAG CGA TAC TGA GGT GGT 血管内皮生长因子 上游GGC TAC CCG CCA CTT CTC AGC 564 下游CTG CTT GAT GGT GGA ACC 基质金属蛋白酶-9 上游CCG CGT GCG AGT CCC TGG TCT G 300 下游CTG ACA TGG AAG TCC ATA GCA G GAPDH 上游GCA GAA AAG CCG GGT GAG GGG 229 下游 TGG CAA TGG GCG GTG GTG ATG
本文编号：3502425
【文章来源】：中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2020,10(03)
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
倒置相差显微镜下观察不同组0和24 h HUVEC细胞伤口愈合 (×100)
表6 低氧及DAPT、JAG-1对HUVEC小管总长的影响(mm,) 低氧 DAPT 平均 JAG-1 平均 否 是 否 是 否 5.52±0.87 4.13±0.57 4.83±0.92 5.52±0.36 14.62±1.28 10.07±5.62 是 15.4 ±1.24 7.42±0.70 11.41±4.96 15.4 ±1.11 17.32±1.63 16.36±2.27 平均 10.46±5.53 5.78±2.04 8.12±6.53 10.46±5.22 15.97±3.12 13.22±7.46讨 论
用Trizol试剂根据生产厂商的说明从HUVEC中提取总RNA。使用M-MLV Reverse Transcriptase试剂盒将总RNA (1 μg)反转录成cDNA。引物序列如表1所示。使用SYBR Green Real-time PCR Master Mix (QPK-201)在Mx3000pTM实时荧光定量PCR仪上进行RT-PCR。反应体系为20 μL,其中包括1 μL引物、10 μL MixSYBR、1 μL cDNA和6 μL H2O。反应条件如下:95 ℃ 5 min,95 ℃ 10 s,65 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,40个循环。GAPDH作为内参基因。使用2-△△Ct方法进行mRNA相对表达量的计算。实验重复3次。表1 引物序列信息 名称 序列(5＇→3＇) 预期扩增长度(bp) Notch1 上游GGC CGT GTA AGT GTG GTC AGA GC 168 下游 CCT CAG CGT TCG TTT GTA CTG A Dell4 上游CTT GGA GCA GCG CTG GAG TAC 69 下游CCG CTG CAC ACT TCT TGG TCC JAG-1 上游TCT GGG AGT CCC ATG GAA GC 73 下游TAG CAG TGC CCC TAG CTG CCA 低氧诱导因子1α 上游GGT ACG TTC GTT TGC ATG TCG AGC 222 下游CCT CAG CGA TAC TGA GGT GGT 血管内皮生长因子 上游GGC TAC CCG CCA CTT CTC AGC 564 下游CTG CTT GAT GGT GGA ACC 基质金属蛋白酶-9 上游CCG CGT GCG AGT CCC TGG TCT G 300 下游CTG ACA TGG AAG TCC ATA GCA G GAPDH 上游GCA GAA AAG CCG GGT GAG GGG 229 下游 TGG CAA TGG GCG GTG GTG ATG
本文编号：3502425
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