BHL DNA适配体对铜绿假单胞菌群体感应系统抑制作用的研究

发布时间：2017-05-07 19:01

  本文关键词：BHL DNA适配体对铜绿假单胞菌群体感应系统抑制作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究BHL DNA适配体能否在体外有效干扰铜绿假单胞菌群体感应系统,抑制其生物被膜形成,并干扰浮游菌绿脓菌素的生物合成。方法1体外培养铜绿假单胞菌,观察高浓度BHL DNA适配体是否影响铜绿假单胞菌生长曲线。2体外干扰铜绿假单胞菌生物被膜的形成:体外构建铜绿假单胞菌生物被膜模型,给予高浓度BHL DNA适配体进行成膜干扰;光学显微镜观察生物被膜形态学变化;结晶紫染色法定量测定生物被膜。3体外干扰铜绿假单胞菌绿脓菌素的产生:设计适配体组、阴性对照组和文库对照组,培养48小时后采用氯仿萃取法定量测定铜绿假单胞菌绿脓菌素含量。4细胞外DNA(extracellular DNA e DNA)对BHL DNA适配体抑制铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响:氯化锂裂解法抽提铜绿假单胞菌基因组DNA(Genomic DNA g DNA),设计适配体组、阴性对照组、g DNA组和适配体+g DNA组,培养48小时后结晶紫染色法定量测定生物被膜。结果1培养基中含有高浓度BHL DNA适配体时,铜绿假单胞菌的生长曲线与不含适配体的高度一致,并未出现适配体抑制或促进细菌增殖情况。2体外干扰铜绿假单胞菌生物被膜的形成:光学显微镜观察阴性对照和文库对照均显示大片致密的膜状结构。而适配体干扰组Aptamer 1、2、16、46则显示出了单个菌体分布或是疏松网状结构。Aptamer 16干扰下的生物被膜生长几乎被破坏,镜下存在大量散在的单个菌体。结晶紫染色定量测定生物被膜量,阴性对照组与文库对照组的测定值高于适配体组(P0.05),而阴性对照组与文库对照组之间差异无统计学意义。3体外干扰铜绿假单胞菌绿脓菌素的生物合成:适配体组绿脓菌素值低于阴性对照组和文库对照组(P0.05),而阴性对照组与文库对照组之间差异无统计学意义。4细胞外DNA(extracellular DNA e DNA)对BHL DNA适配体抑制铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响:阴性对照组生物被膜定量测定高于适配体组(P0.05),但低于g DNA组和g DNA+适配体组(P0.05);适配体组定量测定值低于g DNA组和g DNA+适配体组(P0.05);g DNA组高于g DNA+适配体组(P0.05)。结论1 BHL DNA适配体不影响细菌增殖,不影响最终体系细菌密度。2 BHL DNA适配体在体外可有效干扰铜绿假单胞菌生物被膜的形成;3 BHL DNA适配体在体外可有效抑制铜绿假单胞菌绿脓菌素生物合成;4 BHL DNA适配体与e DNA共同干预生物被膜形成时,可削弱e DNA对生物被膜形成的促进作用,仍能在一定程度上抑制生物被膜的形成。
【关键词】：适配体 铜绿假单胞菌 群体感应系统 生物被膜 绿脓菌素 eDNA
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378
【目录】：

• 附录5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-15
• 第1章15-25
• 1. 材料15-16
• 1.1 实验菌株15
• 1.2 适配体15
• 1.3 试剂配制15
• 1.4 培养基15-16
• 1.5 主要仪器和试剂16
• 2. 方法16-19
• 2.1 适配体对P.a.体外增殖的影响16
• 2.2 光学显微镜观察体外生物被膜形成16-17
• 2.3 生物被膜检测17-18
• 2.4 适配体抑制P.a.绿脓菌素生物合成18-19
• 3. 结果19-22
• 3.1 适配体对P.a.体外增殖的影响19
• 3.2 光学显微镜观察适配体干扰生物被膜形成实验19-20
• 3.3 生物被膜测定20-21
• 3.4 适配体抑制P.a.绿脓菌素生物合成21-22
• 4. 讨论22-25
• 4.1 BHL适配体对细菌增殖的影响22
• 4.2 适配体体外干扰生物被膜形成22-23
• 4.3 适配体体外干扰绿脓菌素的产生23-25
• 第2章25-29
• 1. 材料25
• 1.1 实验菌株25
• 1.2 培养基25
• 1.3 适配体25
• 1.4 主要仪器和试剂25
• 2. 方法25-27
• 2.1 P.a.基因组抽提25-26
• 2.2 e DNA与适配体干扰后P.a.生物被膜的定量测定26-27
• 3. 结果27
• 4. 讨论27-29
• 结论29-30
• 参考文献30-35
• 综述35-45
• 参考文献41-45
• 致谢45

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