裂殖酵母中Rrp14蛋白介导Pol5蛋白的核仁转运及其对rRNA转录影响的研究

发布时间：2021-11-21 20:38

　　目的:核糖体对于每个细胞中的蛋白质合成来说都是必不可少的。研究表明将细胞增殖与核糖体生物发生联系起来的核仁蛋白是潜在的致癌基因,人的SURF6蛋白是进化保守核仁蛋白中的一种,具有未知的功能,针对该蛋白的研究可能为肿瘤治疗提供新的思路。研究证实,在肿瘤细胞中SURF6基因高表达,这种高表达可能为肿瘤提供核糖体原料来实现其高蛋白表达,但具体参与机制仍然不清楚。因为在裂殖酵母中进行分子生物学操作简便、快捷,同时rrp14基因编码的蛋白与人SURF6蛋白氨基端高度同源,所以本实验选择裂殖酵母作为研究对象来研究蛋白的功能。在裂殖酵母中,SURF6基因分割为rrp14及rrp1402两个不同的基因,它们编码的蛋白分别对应于SURF6的N端及C端,这为我们单独研究SURF6的N端提供了天然的模式生物。本实验中,我们将研究rrp14基因对蛋白的核仁转运以及核糖体RNA的影响。方法:运用基因同源重组的方法制备rrp14基因敲除的酵母,观察酵母生长状况。运用质谱、免疫共沉淀、免疫荧光显微镜等方法研究酵母中原位标记的Rrp14蛋白以及Pol5蛋白之间的关系。运用分子克隆的方法构建所需质粒后转入酵母中,通过P... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

rrp14敲除在酵母细胞生长上的影响

图 3.2 Rrp14 蛋白与 Pol5 蛋白物理间相互作用质谱分析结果 B 免疫共沉淀分析 Rrp14 与 Pol5 蛋白物理间相C 荧光显微镜观察蛋白在细胞中的位置 比例尺=1μm我们已经证实 Rrp14 蛋白在酵母的生长过程中起到重要作用，rp14 功能，我们在基因组对 Rrp14 蛋白的 C 端进行了原位 GF 磁珠对 Rrp14 蛋白及其结合蛋白进行了纯化，通过质谱检测列与 Rrp14 潜在的物理间相互作用蛋白。在这其中，我们首次4 存在潜在互作关系（见图 3.2.A）。由于目前已经知道，Pol5 录因子，而 Rrp14 参与 rRNA 转录，但具体机制仍然不清，我我们，Rrp14 很有可能通过与 Pol5 相互作用进而调控 rRNA 的疫共沉淀技术来确证此二种蛋白的物理间相互作用关系。我们

说明 rrp14Δ、Rrp14-Δ(7-12)会导致 RNA 的总量下降（见图3.5.A）。随后通过实时定量 PCR 观察核糖体 RNA 表达，发现 rrp14Δ、Rrp14-Δ（7-12）酵母的 mRNA 中 28s、18s、ITS1 的表达要比野生型酵母的表达量低（*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001）（见图 3.5.B）。上述结果表明，当 Pol5 蛋白不与 Rrp14 蛋白互作时，该酵母的核糖体相关的 mRNA 表达水平下降，也就说明了 Rrp14 蛋白是通过 Pol5 蛋白影响核糖体RNA 的转录。

【参考文献】：
期刊论文
[1]核糖体蛋白基因及其与人类疾病的研究进展[J]. 杨帆,刘卫平.  临床与实验病理学杂志. 2005(03)

博士论文
[1]酵母核糖体大亚基组装过程的研究[D]. 马成英.清华大学 2017



本文编号：3510200