MF59联合CpG ODN1826通过促进树突状细胞成熟增强重组MUC1-MBP融合蛋白疫苗的抗肿瘤活性研究
发布时间：2021-11-23 20:41
本课题组前期以MUC1为靶点制备了重组MUC1-MBP融合蛋白抗肿瘤疫苗。在疫苗佐剂的筛选中发现,TLR9受体激动剂CpG ODN1826（CpG1826）联合MUC1-MBP不仅能诱导MUC1特异性的体液免疫应答,而且还能诱导细胞免疫应答,能抑制皮下移植黑色素瘤B16-MUC1在小鼠体内的生长,但肿瘤抑制效果仍然不理想、个体差异较大,因此我们试图通过改变剂型来增强MUC1-MBP的抗肿瘤作用。MF59是一种水包油的乳剂,可以明显增强抗原提呈细胞（APC）对抗原的摄取,最早应用于流感疫苗,是诱导Th2应答的佐剂。近年有研究发现,MF59与CpG ODN（CpG）联合可以抑制肿瘤生长,但其作为肿瘤疫苗佐剂的应用价值还没有进行深入探讨,作用机制还不十分清楚。因此,本研究首先探讨MF59与CpG 1826作为MUC1-MBP疫苗的复合佐剂在小鼠体内诱导的免疫活性。结果显示,与单独佐剂CpG 1826比较,复合佐剂MF59/CpG 1826联合MUC1-MBP更显著诱导MUC1特异性的Th1应答和CTL杀伤。进一步通过荷瘤小鼠发现,MF59/CpG 1826联合MUC1-MBP诱导的强大的Th...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：154 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
小鼠肌肉注射疫苗佐剂诱导的转录谱的基因芯片分析
根据肿瘤大小绘制肿瘤生长曲线。使用单因素方差分析（ANOVA）实验数据。当主要实验结果统计学差异显著时，采用双侧 T 检验比较个体治疗的平均值。通过 Kaplan-Meier 方法评估生存期并用对数检验评估。P < 0.05 被认为具有统计学显著性。所有统计分析均使用 SPSS 18.0 软件进行。2.3 实验结果2.3.1 MF59 粒径的检测本研究按照常规方法制备了 MF59，通过粒度仪对 MF59 粒径进行检测，粒径大小如图 2.1A 所示，有效粒径是 7.7 nm，均一度是 0.229，均一度小于 0.7，说明均一度良好，并且在制备 6 个月后再次对粒径进行了检测，如图 2.1B 所示，粒径大小稳定，可以用于后续的实验研究。
表 2.1 电位分析仪检测 MF59 粒径Table 2.1 The particle size analysis of MF59 adjuvant by potential analyzer (n=3)Sample 均一度 有效粒径初次制备 0.229 7.7 nm制备 6 个月后 0.200 7.4 nm2.3.2 流式细胞仪鉴定 B16-MUC1 细胞中 MUC1 的表达B16-MUC1 是本课题组前期制备的稳定转染了人 MUC1 全长基因的 B16 细胞，简称 B16-MUC1，作为靶细胞在 MUC1-MBP 疫苗诱导的 MUC1 特异杀伤活性研究中使用。细胞用含 G418 的培养液培养并传代 3 次，取对数生长期的细胞进行研究，采用流式细胞仪对 MUC1 的表达进行了鉴定，结果如图 2.2 所示，MUC1 阳性表达率 99.2%，可用于后续实验使用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小分子IL-6/STAT3信号通路抑制剂[J]. 叶霁青,岳晓虹,孙丽萍. 化学进展. 2016(07)
[2]DC在抗肿瘤免疫应答中应用的研究进展[J]. 韩策,苏海川. 陕西医学杂志. 2016(06)
[3]癌症中IL-6信号通路研究进展[J]. 唐甜,安东建,曹建国. 现代肿瘤医学. 2016(09)
[4]MF59佐剂对脊髓灰质炎灭活疫苗诱导恒河猴细胞免疫应答的影响[J]. 张雪梅,徐婧雯,吴忠香,王葳,徐小宁,董少忠. 中国生物制品学杂志. 2014(10)
[5]乳佐剂免疫机制的研究进展[J]. 赵兰华,李映波. 医学研究杂志. 2014(02)
[6]以树突状细胞疫苗为基础的肿瘤免疫治疗[J]. 王强,陈德玉. 现代肿瘤医学. 2008(12)
[7]Dendritic Cell-Derived Exosomes Stimulate Stronger CD8+ CTL Responses and Antitumor Immunity than TVimor Cell-Derived Exosomes[J]. Mabood Qureshi,Jim Xiang. Cellular & Molecular Immunology. 2006(03)
博士论文
[1]CpG ODN-MF59辅佐肿瘤抗原诱导抗小鼠黑色素瘤及肺癌的实验研究[D]. 杨明.吉林大学 2012
硕士论文
[1]IL-6抑制单核细胞来源树突状细胞CCR7表达的机制研究[D]. 李腾飞.第三军医大学 2015
[2]STAT3磷酸化抑制人单核细胞来源的树突状细胞成熟机制的初步研究[D]. 董宗明.第三军医大学 2014
本文编号：3514607
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：154 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
小鼠肌肉注射疫苗佐剂诱导的转录谱的基因芯片分析
根据肿瘤大小绘制肿瘤生长曲线。使用单因素方差分析（ANOVA）实验数据。当主要实验结果统计学差异显著时，采用双侧 T 检验比较个体治疗的平均值。通过 Kaplan-Meier 方法评估生存期并用对数检验评估。P < 0.05 被认为具有统计学显著性。所有统计分析均使用 SPSS 18.0 软件进行。2.3 实验结果2.3.1 MF59 粒径的检测本研究按照常规方法制备了 MF59，通过粒度仪对 MF59 粒径进行检测，粒径大小如图 2.1A 所示，有效粒径是 7.7 nm，均一度是 0.229，均一度小于 0.7，说明均一度良好，并且在制备 6 个月后再次对粒径进行了检测，如图 2.1B 所示，粒径大小稳定，可以用于后续的实验研究。
表 2.1 电位分析仪检测 MF59 粒径Table 2.1 The particle size analysis of MF59 adjuvant by potential analyzer (n=3)Sample 均一度 有效粒径初次制备 0.229 7.7 nm制备 6 个月后 0.200 7.4 nm2.3.2 流式细胞仪鉴定 B16-MUC1 细胞中 MUC1 的表达B16-MUC1 是本课题组前期制备的稳定转染了人 MUC1 全长基因的 B16 细胞，简称 B16-MUC1，作为靶细胞在 MUC1-MBP 疫苗诱导的 MUC1 特异杀伤活性研究中使用。细胞用含 G418 的培养液培养并传代 3 次，取对数生长期的细胞进行研究，采用流式细胞仪对 MUC1 的表达进行了鉴定，结果如图 2.2 所示，MUC1 阳性表达率 99.2%，可用于后续实验使用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小分子IL-6/STAT3信号通路抑制剂[J]. 叶霁青,岳晓虹,孙丽萍. 化学进展. 2016(07)
[2]DC在抗肿瘤免疫应答中应用的研究进展[J]. 韩策,苏海川. 陕西医学杂志. 2016(06)
[3]癌症中IL-6信号通路研究进展[J]. 唐甜,安东建,曹建国. 现代肿瘤医学. 2016(09)
[4]MF59佐剂对脊髓灰质炎灭活疫苗诱导恒河猴细胞免疫应答的影响[J]. 张雪梅,徐婧雯,吴忠香,王葳,徐小宁,董少忠. 中国生物制品学杂志. 2014(10)
[5]乳佐剂免疫机制的研究进展[J]. 赵兰华,李映波. 医学研究杂志. 2014(02)
[6]以树突状细胞疫苗为基础的肿瘤免疫治疗[J]. 王强,陈德玉. 现代肿瘤医学. 2008(12)
[7]Dendritic Cell-Derived Exosomes Stimulate Stronger CD8+ CTL Responses and Antitumor Immunity than TVimor Cell-Derived Exosomes[J]. Mabood Qureshi,Jim Xiang. Cellular & Molecular Immunology. 2006(03)
博士论文
[1]CpG ODN-MF59辅佐肿瘤抗原诱导抗小鼠黑色素瘤及肺癌的实验研究[D]. 杨明.吉林大学 2012
硕士论文
[1]IL-6抑制单核细胞来源树突状细胞CCR7表达的机制研究[D]. 李腾飞.第三军医大学 2015
[2]STAT3磷酸化抑制人单核细胞来源的树突状细胞成熟机制的初步研究[D]. 董宗明.第三军医大学 2014
本文编号：3514607
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