Shh/p53/NF-κB信号通路在小鼠肺脏AECⅡ中抗BCG感染的免疫调控作用
发布时间：2021-12-11 22:54
在抗结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染机体的过程中,肺脏上皮细胞（Lung epithelial cells,AEC）是肺脏抵抗感染的第一道“物理屏障”。AEC作为MTB最先侵染的靶细胞之一,通过分泌细胞因子,可以招募肺泡巨噬细胞（Alveolarmacrophage,AMs）到肺泡中,在抗MTB感染的先天免疫中发挥着重要的调控作用。近年来研究发现,在癌症的发生过程中Hedgehog（Hh）信号通路同p53和NF-κB信号通路存在着“cross-talκ”关系,并调控着机体的炎症反应。这就提示我们在MTB感染宿主肺脏时,肺脏上皮细胞与肺泡巨噬细胞中Shh、p53和NF-κB信号通路可能会被活化,并参与调控炎性细胞因子的分泌等来抵御MTB的感染!本研究利用牛结核分枝杆菌减毒株（Bacillus Calmette-Guerin,BCG）感染Shh干扰/过表达的小鼠肺脏上皮细胞TC-1,收集细胞上清液并添加到巨噬细胞RAW264.7细胞,分析肺泡巨噬细胞中p53与NF-κB信号通路相关信号分子的变化以及炎性细胞因子的分泌情况,并建立小鼠BCG腹腔...
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１肺泡上皮细胞与肺泡巨噬细胞Ｍ??Ｆｉｇｕｒｅｌ－１?ａｌｖｅｏｌａｒ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ａｌｖｅｏｌａｒ?ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｌ３４Ｊ??
１．６?Ｓｈｈ／ｐ５３／ＮＦ－ＫＢ信号通路在抗结核感染中的免疫调控作用??Ｓｈｈ信号通路主要在调控人体的发育方面具有调控细胞生长的作用．而ｐ５３信号通路能够对细胞周期进行调控进而调控细胞的凋亡，因此两个信号通路之间可能存在着紧密的系■＝在ＲｅｅｍＭａｌｅｋ的研究说明了这一点，小脑颗粒神经元前体（ＧＮＰ）被破坏后会导致机运动与学习能力的缺陷，他们利用Ｍｄｍ２的一个等位基因〔Ｍｄｍ２ｐｕｒｏ）编码ｐ５３关键负调控??因子ＭＤＭ２从而改变机体内ｐ５３和ＭＤＭ２的表达，他们在缩小的小鼠小脑叶片中调低ＭＤＭ２??的表达后发现，Ｓｈｈ表达量显著下调，Ｓｈｈ信号通路下游Ｇｌｉｌ和Ｇｌｉ２表达量也显著降低，同时??Ｓｈｈ会刺激ＧＮＰ．促进ＭＤＭ２积累并增强丝氨酸１６６的磷酸化．总而言之在ＧＮＰ中，ＭＤＭ２是??ｐ５３和Ｓｈｈ信号通路间联系的纽带［７１］。??近年来的研究表明，Ｓｈｈ信号通路在炎症反应中起到关键作用，而在人体的炎症反应中??ＮＦ－ｋＢ起到关键的调节作用，因此两种信号通路也存在着一定的联系。目前尚不清楚细胞内??是如何利用Ｃｉ／Ｇｌｉ激剂和阻遏物的组合产生特定的转录反应，但已经鉴定了许多共激活剂??（包括ＣＢＰ，介体和Ｈｏｘｄｌ２）和共抑制剂（例如Ｓａｐｌ８，?ｍＳｉｎ３ａ和Ｓｋｉ）?［７２］。在Ｈｐ感染引起的??假性幽门化过程中ＮＦ－ｋＢ能够激活Ｓｈｈ信号通路并激活，实验中也发现在病变组织周围观察??至ｊＪｂｃｌ－２，?Ｇｌｉ－１和ＰＴＣＨ表达量上调［７３］。ＮＦ－ｋＢ和ＩＬ－８是Ｓｌｉｌｉ的两个转录靶标，己经有实验表明??ＮＦ－ｋＢ，ｈｈＮＦ－ｋＢｔ７４］。??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]p53调节蛋白的研究进展[J]. 张红,徐风兰,李鸿岩,胡晓娅,罗冰芝,张哲,刘小琴,孔亚茸. 重庆医学. 2018(21)
[2]2004-2015年中国大陆地区肺结核流行的时空分布特征[J]. 喻国旗,雷明智,魏怡,龙冰霜,陈世艺,唐咸艳,张志勇,覃健. 现代预防医学. 2017(20)
[3]中国(大陆地区)结核病动态监测大数据分析[J]. 史倩楠,赵自雄,马家奇. 中国卫生信息管理杂志. 2017(05)
[4]人口流入城市肺结核流行特征、时空分布及其社会影响因素分析[J]. 杨天池,洪航,陈同,于梅. 中国人兽共患病学报. 2017(09)
[5]Hedgehog、p53和NF-κB信号通路在病原微生物入侵机体时的免疫应答机制[J]. 任奇杰,程龙,丁向真,杨易,周学章,刘晓明,李勇. 中国兽医学报. 2016(07)
[6]结核分枝杆菌感染小鼠动物模型的建立及研究进展[J]. 董江涛,张万江. 中国病原生物学杂志. 2011(08)
硕士论文
[1]Hedgehog和NF-κB信号通路在Mtb感染AEC Ⅱ的炎症反应中的调控机制[D]. 任奇杰.宁夏大学 2016
本文编号：3535543
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１肺泡上皮细胞与肺泡巨噬细胞Ｍ??Ｆｉｇｕｒｅｌ－１?ａｌｖｅｏｌａｒ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ａｌｖｅｏｌａｒ?ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｌ３４Ｊ??
１．６?Ｓｈｈ／ｐ５３／ＮＦ－ＫＢ信号通路在抗结核感染中的免疫调控作用??Ｓｈｈ信号通路主要在调控人体的发育方面具有调控细胞生长的作用．而ｐ５３信号通路能够对细胞周期进行调控进而调控细胞的凋亡，因此两个信号通路之间可能存在着紧密的系■＝在ＲｅｅｍＭａｌｅｋ的研究说明了这一点，小脑颗粒神经元前体（ＧＮＰ）被破坏后会导致机运动与学习能力的缺陷，他们利用Ｍｄｍ２的一个等位基因〔Ｍｄｍ２ｐｕｒｏ）编码ｐ５３关键负调控??因子ＭＤＭ２从而改变机体内ｐ５３和ＭＤＭ２的表达，他们在缩小的小鼠小脑叶片中调低ＭＤＭ２??的表达后发现，Ｓｈｈ表达量显著下调，Ｓｈｈ信号通路下游Ｇｌｉｌ和Ｇｌｉ２表达量也显著降低，同时??Ｓｈｈ会刺激ＧＮＰ．促进ＭＤＭ２积累并增强丝氨酸１６６的磷酸化．总而言之在ＧＮＰ中，ＭＤＭ２是??ｐ５３和Ｓｈｈ信号通路间联系的纽带［７１］。??近年来的研究表明，Ｓｈｈ信号通路在炎症反应中起到关键作用，而在人体的炎症反应中??ＮＦ－ｋＢ起到关键的调节作用，因此两种信号通路也存在着一定的联系。目前尚不清楚细胞内??是如何利用Ｃｉ／Ｇｌｉ激剂和阻遏物的组合产生特定的转录反应，但已经鉴定了许多共激活剂??（包括ＣＢＰ，介体和Ｈｏｘｄｌ２）和共抑制剂（例如Ｓａｐｌ８，?ｍＳｉｎ３ａ和Ｓｋｉ）?［７２］。在Ｈｐ感染引起的??假性幽门化过程中ＮＦ－ｋＢ能够激活Ｓｈｈ信号通路并激活，实验中也发现在病变组织周围观察??至ｊＪｂｃｌ－２，?Ｇｌｉ－１和ＰＴＣＨ表达量上调［７３］。ＮＦ－ｋＢ和ＩＬ－８是Ｓｌｉｌｉ的两个转录靶标，己经有实验表明??ＮＦ－ｋＢ，ｈｈＮＦ－ｋＢｔ７４］。??
抗兔丨ｇＧ－ＨＲＰ?羊?中山金桥?ＺＢ－２３０】?１：１０００??２．１．６慢病毒表达载体??慢病毒购买于吉凯公司，表达载体见表２－５，慢病毒骨架见图２－１。??表２－５?Ｓｈｈ慢病毒载体??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｅｎｌｉｖｉｒｕｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??名称??滴度／浓度???Ｓｈｈ?过表达载体?ＬＶ－Ｓｈｈ（４０７８７－ｌ）?２Ｅ＋８ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ?抑制载体?ＬＶ－Ｓｈｈ－ＲＮＡｉ（６３１?丨丨－１）〗Ｅ＋９ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ?抑制载体?ＬＶ－Ｓｈｈ－ＲＮＡｉ（６３ｎ〇－Ｉ）?ｌＥ＋９ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ?抑制载体?ＬＶ－Ｓｈｈ－ＲＮＡｉ（６３１１２－丨）８Ｅ＋８ＴＵ／ｍｌ??Ｓｈｈ阴性对照病毒?ＣＯＮ３１３?８Ｅ＋８ＴＵ／ｍｌ??Ｉ?－?＼??图２－１?Ｓｈｈ干扰慢病毒骨架载体图谱?图２－２?Ｓｈｈ过表达慢病毒骨架载体图谱??Ｆｉｇ．２－１?Ｓｈｈ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋａｇｉｎｇ?ｐｌａｓｍｉｄ?Ｆｉｇ．２－２?Ｓｈｈ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋａｇｉｎｇ?ｐｌａｓｍｉｄ??２．２实验方法??２．２．１?ＴＣ－１细胞培养??收到细胞后，取出装有细胞的培养瓶在显微镜下观察细胞生长情况。??ａ）如果细胞未超过８０％密度时，用７５％酒精喷洒整个瓶身消毒后放入超净台内，严??格进行无菌操作
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53调节蛋白的研究进展[J]. 张红,徐风兰,李鸿岩,胡晓娅,罗冰芝,张哲,刘小琴,孔亚茸. 重庆医学. 2018(21)
[2]2004-2015年中国大陆地区肺结核流行的时空分布特征[J]. 喻国旗,雷明智,魏怡,龙冰霜,陈世艺,唐咸艳,张志勇,覃健. 现代预防医学. 2017(20)
[3]中国(大陆地区)结核病动态监测大数据分析[J]. 史倩楠,赵自雄,马家奇. 中国卫生信息管理杂志. 2017(05)
[4]人口流入城市肺结核流行特征、时空分布及其社会影响因素分析[J]. 杨天池,洪航,陈同,于梅. 中国人兽共患病学报. 2017(09)
[5]Hedgehog、p53和NF-κB信号通路在病原微生物入侵机体时的免疫应答机制[J]. 任奇杰,程龙,丁向真,杨易,周学章,刘晓明,李勇. 中国兽医学报. 2016(07)
[6]结核分枝杆菌感染小鼠动物模型的建立及研究进展[J]. 董江涛,张万江. 中国病原生物学杂志. 2011(08)
硕士论文
[1]Hedgehog和NF-κB信号通路在Mtb感染AEC Ⅱ的炎症反应中的调控机制[D]. 任奇杰.宁夏大学 2016
本文编号：3535543
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