不同佐剂对病毒灭活疫苗免疫效果的影响
发布时间：2021-12-22 09:41
目的探讨两种不同佐剂CpG和纳米乳（Nanoemulsion）对病毒灭活疫苗免疫效果的影响。方法以灭活猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）培养液为例,将骨髓来源树突状细胞（BMDC）与含有不同免疫佐剂的PDCoV灭活疫苗共孵育。抗体染色后使用流式细胞仪检测BMDC成熟、活化情况。成年健康C57BL/6J雌性小鼠20只,鼠龄6～8周;随机分成4组,分别接种磷酸盐缓冲溶液（PBS）、灭活PDCoV液、CpG/PDCoV疫苗和Nanoemulsion/PDCoV疫苗,皮下免疫3次,时间间隔为1周;第21天杀死小鼠获取脾脏和血液,检测不同PDCoV灭活疫苗接种小鼠免疫反应情况。结果 Nanoemulsion可负载灭活PDCoV的抗原成分,形成平均粒径为（157.6±0.4） nm的纳米粒,而CpG与灭活PDCoV则是无规则混合。Cp G/PDCoV组或Nanoemulsion/PDCoV组促BMDC成熟程度分别为45.57%和53.32%（CD86+MHCⅡ+BMDC）,明显高于PDCoV组（38.49%）,差异有统计学意义（P <0.01、P <0.05）。第21天,CpG/PDCoV...
【文章来源】：生物医学工程与临床. 2020,24(05)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
Nanoemulsion(A）和Nanoemulsion/PDCo V疫苗（B）的粒径分布曲线
将不同疫苗与BMDC共培养，抗体染色后用流式细胞仪检测BMDC表面相关标志物的表达。如图2所示，Cp G/PDCo V组和Nanoemulsion/PDCo V组引起CD86+MHCⅡ+BMDC比例分别为53.32%、45.57%，明显高于PBS组（26.51%）和PDCo V组（38.49%），差异有统计学意义（Cp G/PDCo V组vs PBS组：t=12.45,F=6.84,P<0.001。Cp G/PDCo V组vs PDCo V组：t=4.54,F=1.63,P<0.01。Nanoemulsion/PDCo V组vs PBS组：t=9.41,F=5.94,P<0.001。Nanoemulsion/PDCo V组vs PDCo V组：t=2.23,F=1.88,P<0.05）。PBS组与PDCo V组间差异同样存在统计学意义（t=4.47,F=11.18,P<0.01）。这些结果说明单纯PDCo V能够促进BMDC成熟，佐剂的加入显著提高了疫苗激活BMDC的效果。2.3 灭活疫苗体内免疫效果
病毒可以利用宿主细胞系统进行增殖，在细胞内产生大量的病毒颗粒，致使细胞发生病变、死亡甚至癌变。病毒疫苗需要诱导细胞免疫杀死机体内被感染的细胞，释放胞内病毒，进而需要特异性抗体清除胞外病毒，从而对该病达到防控效果。笔者通过两种不同作用机制佐剂（Cp G和Nanoemulsion）分别与含有抗原成分的PDCo V培养液混合制备PDCo V灭活疫苗来探讨其对灭活PDCo V免疫效果的影响。Cp G是一种Toll样受体-9(Toll-like receptor 9,TLR-9）激动剂，活化树突状细胞（dendritic cells,DC），促进Th1型细胞免疫；Nanoemulsion是一种递送载体，促进DC对抗原的胞吞和呈递。PDCo V培养液与Nanoemulsion混合，可能会导致一些抗原成分，比如蛋白、核酸等吸附在纳米粒表面或负载到Nanoemulsion中，形成粒径均一的纳米疫苗。笔者实验通过DLS分析佐剂和疫苗粒径大小及分散度。Nanoemulsion负载灭活PDCo V抗原成分之后粒径大小和分布没有发生明显的变化，说明Nanoemulsion可以较好地封装病毒抗原成分，起到保护和缓释抗原的效果，而且100～200 nm大小的纳米粒有利于淋巴结的聚集，从而促进机体免疫应答[7]。然而，Cp G和灭活PDCo V并未发生共组装，只是形成简单的混合物。
本文编号：3546186
【文章来源】：生物医学工程与临床. 2020,24(05)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
Nanoemulsion(A）和Nanoemulsion/PDCo V疫苗（B）的粒径分布曲线
将不同疫苗与BMDC共培养，抗体染色后用流式细胞仪检测BMDC表面相关标志物的表达。如图2所示，Cp G/PDCo V组和Nanoemulsion/PDCo V组引起CD86+MHCⅡ+BMDC比例分别为53.32%、45.57%，明显高于PBS组（26.51%）和PDCo V组（38.49%），差异有统计学意义（Cp G/PDCo V组vs PBS组：t=12.45,F=6.84,P<0.001。Cp G/PDCo V组vs PDCo V组：t=4.54,F=1.63,P<0.01。Nanoemulsion/PDCo V组vs PBS组：t=9.41,F=5.94,P<0.001。Nanoemulsion/PDCo V组vs PDCo V组：t=2.23,F=1.88,P<0.05）。PBS组与PDCo V组间差异同样存在统计学意义（t=4.47,F=11.18,P<0.01）。这些结果说明单纯PDCo V能够促进BMDC成熟，佐剂的加入显著提高了疫苗激活BMDC的效果。2.3 灭活疫苗体内免疫效果
病毒可以利用宿主细胞系统进行增殖，在细胞内产生大量的病毒颗粒，致使细胞发生病变、死亡甚至癌变。病毒疫苗需要诱导细胞免疫杀死机体内被感染的细胞，释放胞内病毒，进而需要特异性抗体清除胞外病毒，从而对该病达到防控效果。笔者通过两种不同作用机制佐剂（Cp G和Nanoemulsion）分别与含有抗原成分的PDCo V培养液混合制备PDCo V灭活疫苗来探讨其对灭活PDCo V免疫效果的影响。Cp G是一种Toll样受体-9(Toll-like receptor 9,TLR-9）激动剂，活化树突状细胞（dendritic cells,DC），促进Th1型细胞免疫；Nanoemulsion是一种递送载体，促进DC对抗原的胞吞和呈递。PDCo V培养液与Nanoemulsion混合，可能会导致一些抗原成分，比如蛋白、核酸等吸附在纳米粒表面或负载到Nanoemulsion中，形成粒径均一的纳米疫苗。笔者实验通过DLS分析佐剂和疫苗粒径大小及分散度。Nanoemulsion负载灭活PDCo V抗原成分之后粒径大小和分布没有发生明显的变化，说明Nanoemulsion可以较好地封装病毒抗原成分，起到保护和缓释抗原的效果，而且100～200 nm大小的纳米粒有利于淋巴结的聚集，从而促进机体免疫应答[7]。然而，Cp G和灭活PDCo V并未发生共组装，只是形成简单的混合物。
本文编号：3546186
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