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Drosha在早孕期小鼠子宫内膜的表达规律及在胚胎着床过程中的作用

发布时间:2017-05-11 17:07

  本文关键词:Drosha在早孕期小鼠子宫内膜的表达规律及在胚胎着床过程中的作用,,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:目的胚胎的成功着床是活性胚泡和接受态子宫之间相互作用的结果。在啮齿动物中子宫处于接受态的时间很短,而且它的及时到来对胚胎着床至关重要,蜕膜化的过程和维持对于着床更是必不可少的。着床过程受到许多分子的调控,比如激素、细胞因子、生长因子等。MicroRNA(miRNA)作为基因表达调节器,已被证实参与胚胎着床的调控,Drosha和Dicer在生成成熟miRNA过程中起着非常关键的作用,Dicer和Drosha的表达水平会直接影响到miRNA的成熟和表达及其对相关基因的调节。因为miRNA在胚胎着床中扮演着重要的角色,以此推测Dicer和Drosha在胚胎着床中应该也起着非常重要的作用。已经有研究表明,Dicer参与雌性生殖系统及胚胎的发育。然而,Drosha在小鼠子宫内膜中的表达以及在胚胎着床过程中功能仍不是很清楚。我们前期在DGE(数字基因表达谱)结果中发现,Drosha的表达在小鼠着床点和着床旁具有显著差异,我们推测这种差异与胚胎着床可能相关。因此,本研究检测了Drosha在小鼠早孕期子宫内膜的表达规律,雌孕激素对其的影响,并探索Drosha在胚胎着床中的功能。方法(1)应用荧光定量PCR(qPCR),蛋白免疫印迹技术(WB)和免疫组织化学(IHC)的方法检测了Drosha mRNA和蛋白在真孕,假孕小鼠子宫内膜中的表达模式。为了检测Drosha的表达是不是受到雌孕激素的调控,我们应用蛋白免疫印迹(WB)和免疫组织和化学技术(IHC)检测了Drosha在激素处理后的小鼠子宫中的表达情况。(2)通过宫角注射玉米油,免疫组织化学(IHC)和蛋白免疫印迹技术(WB)检测了人工诱导蜕膜化后Drosha蛋白的表达部位和表达量。(3)同时,分离培养小鼠子宫内膜基质细胞,体外诱导蜕膜化,荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹技术(WB)检测了Drosha mRNA和蛋白随着蜕膜化过程的表达规律结果(1)在早期正常妊娠的小鼠子宫内膜中,Drosha具有时空表达特性,Drosha的mRNA和蛋白在d4开始升高,并在d6达到高峰。(2) Drosha在妊娠d5胚胎着床点的表达明显高于着床旁。(3)假孕小鼠子宫内膜Drosha的表达低于正常妊娠小鼠。(4)类固醇激素处理模型中发现Drosha的表达受P4的调控。(5)宫角注射玉米油,体内人工诱导蜕膜化后,与对照相比,Drosha的表达显著升高(6)分离培养小鼠子宫内膜基质细胞,体外诱导蜕膜化,随着蜕膜化进程,Drosha及蜕膜化标志物的表达逐渐升高。结论实验结果表明,在妊娠早期,真孕和假孕小鼠的子宫内膜中Drosha具有一定的时空表达特性。Drosha在小鼠子宫内膜植入窗口期和人工诱导蜕膜化模型中高表达,并且Drosha基因受到P4的调控,表明Drosha可能参与了胚胎着床的过程,我们推测Drosha可能通过调控miRNAs的成熟来参与这个过程,然而具体机制仍需要进一步研究。
【关键词】:DROSHA MicroRNA 胚胎着床
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R321
【目录】:
  • 英汉缩略语名词对照5-7
  • 中文摘要7-10
  • 英文摘要10-14
  • 前言14-15
  • 1 材料和方法15-22
  • 2 结果22-30
  • 3 讨论30-32
  • 全文总结与展望32-33
  • 参考文献33-36
  • 文献综述:MiRNA和Drosha在肿瘤中的研究进展36-41
  • 参考文献38-41
  • 致谢41-42
  • 攻读硕士学位期间发表学术论文情况42

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