蛋白磷酸酶PP2A在胸腺细胞选择中对促进T细胞存活的重要作用
发布时间：2022-02-09 02:24
T淋巴细胞是机体抵抗外界病原体的最重要的免疫细胞,其在胸腺发育和选择的过程中获得抗原特异性并建立对自身抗原的耐受,因此发育过程一直是国际免疫学界关注的热点研究领域之一。T细胞在胸腺中的发育过程主要经历以下阶段:骨髓来源的前体细胞经过胸腺皮髓交界处的血管进入到胸腺的皮质。这一时期细胞表面不表达CD4和CD8分子,称为双阴性CD4-CD8-（DN）细胞。根据细胞表面CD25和CD44分子的表达情况,DN细胞又可细分为DN1（CD25-CD44-）,DN2（CD25-CD44+）,DN3（CD25+CD44+）,DN（CD25+CD44-）4 四个阶段。之后细胞表面开始同时表达CD4和CD8分子,故称为双阳性CD4+CD8+（DP）细胞。DP在胸腺皮质完成阳性选择后迁移到胸腺的髓质部位,经阴性选择去除与自身抗原高清合力的克隆,发育为成熟的CD4+或CD8+单阳性（SP）T细胞,之后迁移到外周发挥免疫功能。在此过程中,只有少数表达与自身抗原肽MHC复合物有适度亲和力的T细胞受体（T-cell Receptor,TCR）的胸腺细胞能通过细胞选择过程存活下来,发育为成熟的T细胞。因此对于胸腺细胞的...
【文章来源】：浙江大学浙江省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３．１胸腺Ｔ细胞的磷酸化质谱分析和Ｐｐ；？２ｃｆｌ条件性敲除小鼠的构建??Ｆｉｇｕｒｅ３．１?Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ?ｍａｓｓ?ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ?ｏｆ?
ＰＰ２ＡｃＫ０小鼠的生长和繁殖均无明显的缺陷，接着我们针对Ｔ细胞的发育进??行了表型分析。我们发现ｃＫＯ小鼠与同窝的野生型对照小鼠相比，胸腺明显减小??（图３．３．１?Ａ，?ｌｅｆｔ），且胸腺细胞数目大幅度减少（图３．３．１?Ａ，?ｒｉｇｈｔ）。ＨＥ染色显示??ＰＰ２Ａ敲除之后胸腺的髄质减小（图３．３．１?Ｂ）。流式细胞检测结果显示，与同窝的??野生型小鼠相比，ｃＫＯ小鼠胸腺中ＤＮ细胞百分比增加，ＤＰ细胞百分比减少。ＤＰ、??ＣＤ＾Ｔ、ＣＤ８＋Ｔ细胞数目明显减少（图３．３．１?Ｃ）。我们对ＤＮ细胞进一步的分析，??发现ｃＫＯ小鼠ＤＮ１－ＤＮ４四个阶段细胞的百分比和细胞数没有变化（图３．３．１?Ｄ）。??ＤＮ期之后胸腺细胞表达ＣＤ８分子，发育为一个介于ＤＮ和ＤＰ之间的阶段ＩＳＰ??（ｉｍｍａｔｕｒｅ?ｓｉｎｇｌｅ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ）?ＣＤ８＋?Ｔ细胞。流式分析结果也显示：ＰＰ２Ａ缺失后ＩＳＰ??阶段发育不受影响（图３．３．１?Ｅ）。这些结果提示，ＰＰ２Ａ敲除之后，胸腺Ｔ细胞的??发育缺陷始于ＤＰ阶段。沖丁细胞是执行固有免疫功能的Ｔ细胞，其ＴＣＲ由Ｙ和３??链组成［６５］。此类Ｔ细胞主要分布于肠道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下组织，??在外周血中只占ＣＤ３＋Ｔ细胞的０．５％－１％。？？２八敲除后Ｙ５Ｔ细胞不受影响（图３．３．１??Ｆ）。ＮＫＴ细胞是一群表达ＮＫ细胞ｍａｒｋｅｒ的胸腺Ｔ
?实验结果??图３．１．２?Ｐｐｐ２ｃａ条件性敲除小鼠胸腺Ｔ细胞发育受阻??Ｆｉｇｕｒｅ?３．３．１?Ｂｌｏｃｋｅｄ?Ｔ?ｃｅｌｌ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｉｎ?Ｐｐｐ２ｃａ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｍｉｃｅ．??（Ｅ）?Ｓｕｒｆａｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣＤ２４?ａｎｄ?ＴＣＲｂ?ｔｏ?ｓｈｏｗ?ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ＩＳＰ??（Ｉｍｍａｔｕｒｅ?Ｓｉｎｇｌｅ?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ＣＤ８＋）．?（Ｆ）?ｙｐ?Ｔ?ｉｓ?ｎｏｔ?ａｆｆｅｃｔ?ｉｎ?ＰＰ２Ａ?ｃＫＯ?ｍｉｃｅ?ｔｈｙｍｕｓ．?（Ｇ）??Ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｎＴｒｅｇ?ｆｒｏｍ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｍｉｃｅ．?（Ｈ）?Ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ｏｆ??ＮＫＴ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｔｈｙｍｕｓ．?＊Ｐ?＜?０．０５；?＊＊Ｐ?＜０．０１；?＊＊＊Ｐ?＜?０．００１．??３．３．２胸腺Ｔ细胞的体外发育诱导??为了进一步确认Ｔ细胞发育受阻是由于Ｔ细胞本身缺失ＰＰ２Ａｃ所引起的，我??们利用ＯＰ９－ＤＬ１共培养体外诱导胸腺Ｔ细胞发育。我们分选了胸腺ＤＮ３细胞，??与ＯＰ９－ＤＬ１共培养并补充所需的细胞因子ＩＬ－７和Ｆｌｔ－３Ｌ，５天之后分析ＤＮ３细胞??的发育情况［６８，６９］。结杲显示：与ＷＴ相比，ｃＫＯ小鼠ＤＮ３时期的细胞向ＤＮ４??的发育没有受到影响（图３．３．２?Ａ）；但是ＤＮ的百分比增加，ＤＰ百分比减少（图??３．３＿２?Ｂ）。提示我们ＰＰ２Ａ缺失之后
本文编号：3616203
【文章来源】：浙江大学浙江省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３．１胸腺Ｔ细胞的磷酸化质谱分析和Ｐｐ；？２ｃｆｌ条件性敲除小鼠的构建??Ｆｉｇｕｒｅ３．１?Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ?ｍａｓｓ?ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ?ｏｆ?
ＰＰ２ＡｃＫ０小鼠的生长和繁殖均无明显的缺陷，接着我们针对Ｔ细胞的发育进??行了表型分析。我们发现ｃＫＯ小鼠与同窝的野生型对照小鼠相比，胸腺明显减小??（图３．３．１?Ａ，?ｌｅｆｔ），且胸腺细胞数目大幅度减少（图３．３．１?Ａ，?ｒｉｇｈｔ）。ＨＥ染色显示??ＰＰ２Ａ敲除之后胸腺的髄质减小（图３．３．１?Ｂ）。流式细胞检测结果显示，与同窝的??野生型小鼠相比，ｃＫＯ小鼠胸腺中ＤＮ细胞百分比增加，ＤＰ细胞百分比减少。ＤＰ、??ＣＤ＾Ｔ、ＣＤ８＋Ｔ细胞数目明显减少（图３．３．１?Ｃ）。我们对ＤＮ细胞进一步的分析，??发现ｃＫＯ小鼠ＤＮ１－ＤＮ４四个阶段细胞的百分比和细胞数没有变化（图３．３．１?Ｄ）。??ＤＮ期之后胸腺细胞表达ＣＤ８分子，发育为一个介于ＤＮ和ＤＰ之间的阶段ＩＳＰ??（ｉｍｍａｔｕｒｅ?ｓｉｎｇｌｅ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ）?ＣＤ８＋?Ｔ细胞。流式分析结果也显示：ＰＰ２Ａ缺失后ＩＳＰ??阶段发育不受影响（图３．３．１?Ｅ）。这些结果提示，ＰＰ２Ａ敲除之后，胸腺Ｔ细胞的??发育缺陷始于ＤＰ阶段。沖丁细胞是执行固有免疫功能的Ｔ细胞，其ＴＣＲ由Ｙ和３??链组成［６５］。此类Ｔ细胞主要分布于肠道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下组织，??在外周血中只占ＣＤ３＋Ｔ细胞的０．５％－１％。？？２八敲除后Ｙ５Ｔ细胞不受影响（图３．３．１??Ｆ）。ＮＫＴ细胞是一群表达ＮＫ细胞ｍａｒｋｅｒ的胸腺Ｔ
?实验结果??图３．１．２?Ｐｐｐ２ｃａ条件性敲除小鼠胸腺Ｔ细胞发育受阻??Ｆｉｇｕｒｅ?３．３．１?Ｂｌｏｃｋｅｄ?Ｔ?ｃｅｌｌ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ?ｉｎ?Ｐｐｐ２ｃａ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｍｉｃｅ．??（Ｅ）?Ｓｕｒｆａｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣＤ２４?ａｎｄ?ＴＣＲｂ?ｔｏ?ｓｈｏｗ?ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ＩＳＰ??（Ｉｍｍａｔｕｒｅ?Ｓｉｎｇｌｅ?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ＣＤ８＋）．?（Ｆ）?ｙｐ?Ｔ?ｉｓ?ｎｏｔ?ａｆｆｅｃｔ?ｉｎ?ＰＰ２Ａ?ｃＫＯ?ｍｉｃｅ?ｔｈｙｍｕｓ．?（Ｇ）??Ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｎＴｒｅｇ?ｆｒｏｍ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｍｉｃｅ．?（Ｈ）?Ｔｈｅ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ?ｏｆ??ＮＫＴ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｔｈｙｍｕｓ．?＊Ｐ?＜?０．０５；?＊＊Ｐ?＜０．０１；?＊＊＊Ｐ?＜?０．００１．??３．３．２胸腺Ｔ细胞的体外发育诱导??为了进一步确认Ｔ细胞发育受阻是由于Ｔ细胞本身缺失ＰＰ２Ａｃ所引起的，我??们利用ＯＰ９－ＤＬ１共培养体外诱导胸腺Ｔ细胞发育。我们分选了胸腺ＤＮ３细胞，??与ＯＰ９－ＤＬ１共培养并补充所需的细胞因子ＩＬ－７和Ｆｌｔ－３Ｌ，５天之后分析ＤＮ３细胞??的发育情况［６８，６９］。结杲显示：与ＷＴ相比，ｃＫＯ小鼠ＤＮ３时期的细胞向ＤＮ４??的发育没有受到影响（图３．３．２?Ａ）；但是ＤＮ的百分比增加，ＤＰ百分比减少（图??３．３＿２?Ｂ）。提示我们ＰＰ２Ａ缺失之后
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