从自然感染病例中获得超强的抗MERS人源中和抗体库的研究

发布时间：2022-02-09 12:43

　　中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）是目前已发现的六种人冠状病毒中自严重急性呼吸系统综合症（Sever acute respiratory syndrome,SARS）以来的的第二种高致病性人冠状病毒,截至2018年3月,世界卫生组织（World Health Organization,WHO）数据显示超过27个国家报告了 MERS病例,其中有2189例实验室确诊病例,782例死亡病例,高达35%的病死率。迄今尚无有效的预防性疫苗与抗病毒药物的应用是报道。借鉴被动免疫治疗及人源中和单抗在新发传染病应急治疗中的应用报道,多项研究提示应用MERS-CoV特异性人源中和抗体已被认为是有效的治疗方案选项。目前国内外在MERS-CoV特异性人源中和抗体研究上虽有一定进展,但大多数人源抗体中和活性不强,仍需研发获得更多更强的MERS-CoV特异性人源中和抗体,并对其中和表位与分子机制进行更全面深入的分析,为疫苗研发及中和抗体的临床应用提供基础。在这项研究中,我们从2015年中国首例输入性MERS-CoV... 

【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

预防组和治疗组转基因小鼠免疫流程图

图４?ＭＥＲＳ－ＣｏＶ感染患者外周血Ｂ细胞的筛选结果。??步骤１．从收集的ＭＥＲＳ－ＣｏＶ患者的ＰＢＭＣ中分离Ｂ细胞，然后在含有３Ｔ３细胞，ｈＩＬ－２，??ＣｐＧ２００６和ｈＩＬ－２１的情况下在９６孔板中培养１０天。??步骤２．通过ＥＬＩＳＡ方法验证Ｂ细胞培养上清液与ＭＥＲＳ－ＣｏＶ－Ｓ的结合活性。??

扩増片段为４００ｂｐ。各个扩增产物及表达载体：重链载体ＩｇＧ－ＡｂＶｅｃ??（ＰＢＲ３２２?ｂａｓｅｄ）、轻链载体?ＩｇＬＡｂＶｅｃ?（ＰＢＲ３２２?ｂａｓｅｄ）、ＩｇＫ－ＡｂＶｅｃ?（ＰＢＲ３２２??ｂａｓｅｄ）分别用相应的内切酶进行酶切反应，具体结果见图６，可变区基因扩增及??酶切良好，相应表达载体酶切良好。并将相应产物片段克隆到表达载体中，所得??质粒送测序分析。??Ｍ５０?Ｈ８?Ｈ２７?Ｈ２８?Ｈ３３?Ｈ３８?Ｈ３９?Ｈ４０?Ｈ４１?Ｈ４２?Ｈ４３?Ｈ４５?Ｍ５Ｋ?Ｈ－Ｖｃｃ?Ｌ－Ｖｅｃ?Ｋ－Ｖｃｃ??Ｍ５０?Ｌ８?Ｌ２７?Ｌ２８?Ｌ３３Ｌ３８Ｌ３９?Ｋ４０?Ｋ４Ｕ．４２?！．４３?Ｕ５??ｍ……編??阁５１１孔抗体基因重链／轻链ＰＣＲ扩增产物及克隆载体双酶切纯化后琼脂糖凝胶电泳图。??Ｍ５０：?５０?ｂｐ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ。Ｍ５ｋ：?５ｋ?ｋｂ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：

【参考文献】：
期刊论文
[1]MERS-CoV动物模型研究进展[J]. 蓝佳明,邓瑶,谭文杰.  病毒学报. 2016(03)
[2]Two-tube multiplex real-time reverse transcription PCR to detect six human coronaviruses[J]. Peihua Niu,Jun Shen,Na Zhu,Roujian Lu,Wenjie Tan.  Virologica Sinica. 2016(01)



本文编号：3617028