不同RNA提取及反转录方法对环状RNA聚合酶链反应的影响

发布时间：2022-02-15 23:35

　　目的比较不同总RNA提取方法及不同反转录引物对喉鳞状细胞癌细胞株Hep2细胞环状RAN扩增的影响,进一步为环状RNA鉴定与扩增提供可靠的实验方法。方法使用Trizol抽提法和miRNeasy Mini试剂盒提取Hep2细胞中的总RNA;Nanodrop 2000对总RNA进行定量及纯度测定;使用随机引物和通用引物分别对总RNA进步反转录;实时定量聚合酶链反应检测Hep2细胞中环状RNA-circHIPK3及circFLNA的表达。结果 Trizol抽提法提取的RNA浓度和RNA总量高于miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA总浓度结果（P<0.01）,但应用miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA纯度要高于Trizol抽提法（P<0.05）,应用随机引物反转录,能扩增出circHIPK3和circFLNA,而利用通用引物进行反转录,circHIPK3及circFLNA不能被扩增;另外,利用miRNeasy Mini试剂盒法提取总RNA后所扩增出circHIPK3及circFLNA的相对表达量明显高于Trizol抽提法（P<0.01）。结论 miRNeasy M... 

【文章来源】：河北医科大学学报. 2020,41(04)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材 料 与 方 法
    1.1 细胞培养
    1.2 miRNeasy Mini试剂盒提取总RNA
    1.3 Trizol抽提法提取总RNA方法
    1.4 RNA浓度及质量检测
    1.5 反转录反应和过程
    1.6 实时定量PCR(real-time quantitative PCR)
    1.7 琼脂糖凝胶电泳
    1.8 统计学方法
2 结 果
    2.1 miRNeasy Mini试剂盒法与Trizol抽提法提取细胞总RNA的浓度及总量比较
    2.2 miRNeasy Mini试剂盒法与Trizol抽提法提取细胞总RNA的纯度比较
    2.3 随机引物及通用引物进行反转录对对环状RNA扩增的影响
    2.4 不同方法提取总RNA对环状RNA实时定量PCR相对表达量的影响
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]环状RNA及其作为疾病标志物的潜能[J]. 许胜,周露玙,王昆.  中国生物化学与分子生物学报. 2018(02)
[2]环状RNA:一种基因调控RNA[J]. 陈丹峰,张卓,荆清.  生命的化学. 2016(06)
[3]环状RNA研究进展及临床应用[J]. 孔德沛,訾晓渊,孙颖浩.  第二军医大学学报. 2016(03)
[4]环状RNA的生物学功能及其在疾病发生中的作用[J]. 李培飞,陈声灿,邵永富,蒋孝明,肖丙秀,郭俊明.  生物物理学报. 2014(01)



本文编号：3627479