稳定高表达人GPC3的SK-Hep-1细胞系的构建

发布时间：2022-07-04 19:36

　　目的获得稳定高表达人GPC3的SK-Hep-1细胞系。方法构建人GPC3真核表达载体pc DNA3. 1-GPC3,通过电穿孔的方法转染至SK-Hep-1细胞,利用G418进行细胞筛选,获得稳定高表达GPC3的细胞系。再利用Western blot和流式细胞术进行鉴定,分析稳定转染细胞表面GPC3蛋白的表达情况。结果成功构建的真核表达质粒pc DNA3. 1-GPC3,检测发现SK-Hep-1细胞G418最佳筛选浓度为700μg/m L,利用该浓度G418筛选转染SK-Hep-1细胞,获得了细胞表面能够稳定高表达人GPC3蛋白的SK-Hep-1细胞系。结论建立高表达人GPC3蛋白的SK-Hep-1稳定细胞系,为研究靶向GPC3肝癌抗体提供了物质基础。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
    1.2 主要试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 pcDNA3.1-GPC3质粒构建与鉴定
        1.3.2 SK-Hep-1细胞最佳G418筛选浓度的确定
        1.3.3 SK-Hep-1细胞电转及筛选
        1.3.4 Western blot检测GPC3蛋白表达情况
        1.3.5 流式检测细胞表面GPC3表达情况
2 结果
    2.1 GPC3的合成及表达载体构建
    2.2 重组真核表达质粒鉴定
    2.3 SK-Hep-1细胞最佳G418筛选浓度确定
    2.4 Western blot检测GPC3的表达
    2.5 流式细胞检测稳定转染细胞表面GPC3的表达
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3655795