铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA0575对表型的影响

发布时间：2022-07-14 20:22

　　【背景】铜绿假单胞菌PAO1中存在与环鸟苷二磷酸（cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP）代谢相关基因PA0575。【目的】探讨铜绿假单胞菌PAO1中环鸟苷二磷酸代谢相关基因PA0575对运动能力及生物膜的影响。【方法】通过PCR对菌株遗传背景进行确认;利用刚果红结合实验及电转PcdrA-gfp质粒间接测量胞内c-di-GMP水平;利用泳动性（swimming）、蜂群泳动（swarming）、蹭行运动（twiching）和生物膜定量实验对细菌进行表型分析,并在运动培养基中添加抗生素研究其对运动能力的影响;针对PA0575基因进行融合蛋白表达载体的构建,并对蛋白进行原核诱导表达。【结果】3株突变体菌株的转座子插入突变位点不一致,胞内c-di-GMP水平检测结果显示,PA0575-1菌株的c-di-GMP含量高于野生型PAO1菌株（P<0.05）,PA0575-2、PA0575-3菌株胞内c-di-GMP水平与野生型PAO1菌株无差异（P>0.05）。运动能力检测实验中,与野生型PAO1菌株相比,PA0575-1菌株泳动性增强（P&... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 主要试剂和仪器及培养基
    1.2 方法
        1.2.1 c-di-GMP水平检测
        1.2.2 生物膜定量实验及运动能力的表型分析
        1.2.3 表达载体的构建与蛋白诱导表达
        1.2.4 统计学方法
2 结果与分析
    2.1 PCR转座子突变验证
    2.2 细菌中c-di-GMP水平的检测
    2.3 细菌运动能力检测及抗生素对运动能力的影响
    2.4 生物膜检测
    2.5 PA0575基因的8个异源表达载体的构建及诱导表达
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]L1.LtrB内含子编码蛋白反转录结构域关键催化位点分析及功能验证[J]. 陈相好,张峥嵘,刘芳,陈峥宏,洪伟,綦廷娜,谷俊莹,崔古贞.  微生物学报. 2019(12)



本文编号：3661815