人miR-302a调控IRF5基因表达在流感病毒感染机制中的研究

发布时间：2022-08-10 17:27

　　流感病毒归属于正粘病毒科,H3N2是根据病毒颗粒包膜表面的病毒蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性进行分类的病毒亚型。流感病毒除感染人类外,还可以感染鸟和猪。通过不同种类的亚型进行基因重组,H3N2可以增强致病力,导致全球范围内的爆发性流行。例如甲型H1N1流感（2009 pdmH1N1）是由H3N2和H1N1重组,在2009年全世界范围内引起巨大的恐慌,造成巨大的经济损失。因此,研究流感病毒的特性和病理性对公众健康非常的重要。流感病毒主要感染上呼吸道表皮细胞,除此外还可以感染吞噬细胞和树突状细胞。流感病毒可引起宿主的先天和获得性免疫反应。通过被感染的宿主细胞模式识别受体TLR7和RIG-I识别,流感病毒可以激活干扰素和炎症因子的表达,例如IL-6、IL-8和TNF-α等,行使抗病毒功能。除此外流感病毒还有自己的一套免疫逃逸机制,例如通过NS1蛋白阻止NF-κB通路和Ⅰ型干扰素的激活和表达。本文主要通过筛选流感病毒H3N2感染中表达谱发生变化的miRNA,研究并证明miRNA靶定的下游基因,以及两者的负反馈调节在病毒介导的宿主免疫反应中的作用机制。实验的方法包括采用生物信息学... 

【文章页数】：98 页

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Abstract
1. 引言
    1.1 流感病毒简述
        1.1.1 流感与流感病毒
        1.1.2 A型流感病毒的基因组结构和生物学特性
        1.1.3 A型流感病毒的复制周期
    1.2 流感病毒与机体免疫
        1.2.1 识别与逃逸
        1.2.2 细胞因子的诱导与产生
    1.3 MicroRNA简介
        1.3.1 MicroRNA的定义
        1.3.2 MicroRNA的产生
        1.3.3 MicroRNA的机制
        1.3.4 MicroRNA与病毒诱导的免疫反应
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 流感病毒株
        2.1.2 细胞系与菌株
        2.1.3 质粒
        2.1.4 小分子干扰RNA
        2.1.5 实验试剂
        2.1.6 仪器设备
        2.1.7 引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞系的培养
        2.2.2 质粒的构建
        2.2.3 转染
        2.2.4 Luciferase活性检测
        2.2.5 基因的mRNA表达的分析
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 统计学分析
3 实验结果
    3.1 miR-302a对流感病毒H3N2侵染的影响
        3.1.1 基因芯片筛选
        3.1.2 验证miR-302a的表达
        3.1.3 miR-302a参与流感病毒H3N2的复制
        3.1.4 miR-302a mimics促进流感病毒H3N2的复制和转录
        3.1.5 miR-302a inhibitors抑制流感病毒H3N2的复制和转录
    3.2 IRF5为miR-302a的靶标基因
        3.2.1 生物信息学预测
        3.2.2 双荧光色素酶检测
        3.2.3 IRF5的mRNA表达检测
        3.2.4 IRF5的蛋白质水平检测
        3.2.5 流感H3N2侵染下miR-302a与IRF5的表达
    3.3 IRF5基因调控流感病毒H3N2的复制
        3.3.1 过表达IRF5抑制流感病毒H3N2的复制和转录
        3.3.2 下调IRF5表达促进流感病毒H3N2的复制和转录
    3.4 miR-302a/IRF5对流感病毒介导的宿主免疫反应的影响
        3.4.1 IRF5参与流感病毒介导的宿主免疫反应
        3.4.2 miR-302a通过调控IRF5参与流感病毒介导的宿主免疫反应
    3.5 miR-302a/IRF5对TLR7细胞通路的调控
        3.5.1 IRF5参与TLR7而非TLR3细胞通路
        3.5.2 miR-302a调控TLR7细胞通路
4 讨论
5 小结
参考文献
致谢



本文编号：3674050