宿主因子CD63对人轮状病毒SA11体外复制的影响

发布时间：2022-08-12 15:40

　　目的测定轮状病毒2种宿主细胞内CD63的高低表达对病毒体外复制的影响,为探究轮状病毒与宿主因子CD63的相互作用机制奠定基础。方法构建CD63沉默表达质粒sh RNA-4038、sh RNA-4041和过表达质粒pc DNA3.1（+）-CD63-flag（CD63-Flag）。质粒转染轮状病毒2种宿主细胞CV-1和MA104,采用实时定量PCR（RT-qPCR）和western blot检测CD63 mRNA和蛋白的表达,筛选CD63高表达细胞株（CD63-H）和低表达细胞株（CD63-L）。轮状病毒SA11感染CD63-L、CD63-H、正常对照细胞组（CNr）及空白对照细胞组（shNC）,采用RT-qPCR、western blot检测病毒基因拷贝数和病毒蛋白表达。结果细胞转染sh RNA-4038和sh RNA-4041质粒后,CD63的表达明显抑制,其中CV-1细胞mRNA和蛋白水平抑制效率分别为69.7%和39.8%,MA104细胞mRNA和蛋白水平抑制效率分别为76.4%和49.3%;CD63-H组细胞内CD63的mRNA和蛋白表达明显增加（P<0.05）。采用滴度... 

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【部分图文】：

轮状病毒蛋白相对表达量

实时荧光定量检测MA104细胞和CV-1细胞中CD63基因m RNA表达

RV实时荧光定量PCR标准曲线

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3676146