氧压抑制霍乱弧菌毒力表达的机制研究

发布时间：2022-08-29 19:44

　　目的外界环境因素会对霍乱弧菌的毒力表达产生影响,AphB作为霍乱弧菌毒力调控网络中的关键因子,受氧压抑制作用明显。本实验旨在研究氧压抑制AphB活性的关键位点及机制。方法利用诱变菌株XL1Red对aphB基因进行随机突变,获得突变子文库;将受到AphB调控的tcpP基因的启动子区域与lux报告基因相融合,获得检测用报告质粒;取含有aphB突变基因及报告质粒的菌株在有氧条件下进行培养,通过检测Lux值筛选目标突变株;利用细菌双杂交系统,进一步研究筛选到的突变位点感受氧压的机制。结果筛选到的突变株S267L、M113I和M244I在有氧条件下均表现出高转录调控活性,分别是WT（野生型）的22.8、173.3、30.2倍（P<0.001）。霍乱弧菌验证S267L、M113I是WT的8.2、13.3倍,M244I是WT的14.8倍（P<0.01）。细菌双杂交实验结果表明M113I通过改变蛋白聚合能力从而抵抗氧压的抑制作用。结论 S267、M113和M244为氧压抑制AphB活性的关键位点。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 菌株与质粒
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 氧压抑制AphB活性的关键位点筛选
            2.1.1 aphB基因突变子文库的建立
            2.1.2 筛选氧压抑制AphB活性的位点
        2.2 筛选所得突变子在霍乱弧菌中的验证
            2.2.1 构建重组质粒pBAD-aphB点突变
            2.2.2 筛选的突变子在霍乱弧菌中的验证
        2.3 细菌双杂交法检测分析氧压抑制AphB活性的机制
            2.3.1 T25和T18融合aphB突变基因的重组质粒构建
            2.3.2 细菌双杂交
结果
    1氧压抑制AphB活性的关键位点筛选
    2筛选所得突变子在霍乱弧菌中的验证
    3 细菌双杂交法研究氧压抑制AphB活性机制
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]甘磷酸胆碱对霍乱弧菌转录调控因子AphB活性的影响[J]. 苏萌,杜娈英,王卉,钟增涛,高妍夏.  中华微生物学和免疫学杂志. 2016 (02)



本文编号：3678900