hDPP4转基因及定点敲入小鼠模型的建立及其对MERS-CoV易感性比较

发布时间：2022-10-21 19:56

　　中东呼吸系统综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）是2012年发现的新型高致病性冠状病毒,其病死率高达34.4%。人二肽基肽酶-4（human dipeptidyl peptidase-4,hDPP4）分子是MERS-CoV进入宿主细胞的受体。为了获得稳定的MERS-CoV易感小鼠模型,本文分别利用Tol2转基因技术和CRISPR/Cas9技术将hDPP4受体导入C57BL/6小鼠,筛选获得转基因小鼠hDPP4-Tg、定点敲入小鼠hDPP4-KI;通过Q-PCR、Western Blot及活体成像技术,分析了hDPP4基因的表达特征。结果显示,在hDPP4-Tg小鼠中,其表达水平较低,在脑中高表达;而在hDPP4-KI中整体表达水平高,表达优势脏器为肺。假病毒感染实验表明,hDPP4-Tg几乎不易感,而hDPP4-KI小鼠对假病毒高度易感。进而,对假病毒感染hDPP4-KI小鼠的感染途径、感染剂量、是否剃除被毛等条件进行优化,获得了稳定易感的MERS-CoV假病毒感染模型,并利用该模型初步评价了单克隆... 

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
材料与方法
    1 伦理与实验动物
    2 基因修饰动物模型的构建
    3 hDPP4表达量检测
        3.1 通过定量即时聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR）检测h DPP4基因在体内表达
        3.2 通过Western Blot检测hDPP4表达
        3.3 活体成像法检测hDPP4基因表达
    4 假病毒构建与滴定
    5 小鼠活体成像及感染途径条件优化
    6利用假病毒感染模型评价抗体抑制活性
结果
    1转基因小鼠的构建及建系
    2两种基因修饰动物模型建系能力比较
    3 hDPP4在hDPP4-Tg、hDPP4-KI小鼠中表达水平比较
    4 MERS-CoV假病毒感染模型的建立
    5 实验条件对MERS-CoV感染结果的影响
    6 利用假病毒模型评价单克隆抗体hMS-1的中和活性
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]MERS-CoV动物模型研究进展[J]. 蓝佳明,邓瑶,谭文杰.  病毒学报. 2016(03)
[2]中东呼吸综合征冠状病毒感染的流行病学进展[J]. 王文玲,谭文杰,李德新.  中华疾病控制杂志. 2016(04)



本文编号：3696280