甲醇致恒河猴认知障碍模型的建立与相关机制研究

发布时间：2022-10-22 19:44

　　背景 认知障碍是脑疾病中诊治最困难的疾病之一,阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）是老年人最常见的以认知功能障碍为主要表现的神经退行性疾病。近年来研究发现,长期暴露于浓度超标的甲醛环境,会损伤人的学习记忆、情感认知等功能,也有报道称AD病人和小鼠模型尿液和脑组织中内源性甲醛含量均升高。甲醇是一种毒性物质,有研究认为它在体内发挥毒性主要通过中间代谢产物甲醛,低浓度甲醇慢性喂养恒河猴,可以引起认知障碍和磷酸化tau蛋白的增多。但甲醇/内源性甲醛引起认知损伤的机制尚不确定,对于甲醇慢性暴露造成的机体损伤尚无研究全面阐述。本课题拟通过体外实验探讨甲醛对神经细胞的损伤作用,通过体内恒河猴实验建立认知障碍模型,并分析其机制及甲醇慢性暴露对机体的影响。方法 在体外细胞水平,将SH-SY5Y神经瘤细胞暴露于不同浓度的甲醛。采用细胞划痕实验、细胞活性实验检测细胞迁移、形态、活性和增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;透射电镜观察超微结构改变;多因子检测技术检测细胞上清炎性因子;Western Blotting检测细胞内磷酸化tau蛋白、Aβ及线粒体分裂相关蛋白的表达。在体内动物水平,... 

【文章页数】：166 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中英文缩略词
摘要
Abstract
第一部分 甲醛对SH-SY5Y细胞的损伤作用
    前言
    材料和方法
        1. 实验材料
            1.1 细胞系来源
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器设备和耗材
            1.4 主要试剂配制
        2. 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 细胞实验分组与处理
            2.3 细胞划痕实验
            2.4 细胞活性检测实验
            2.5 细胞凋亡检测
            2.6 细胞炎性因子检测
            2.7 透射电镜观察细胞超微结构
            2.8 免疫印迹法检测相关蛋白表达情况
        3. 统计方法
    结果
        1. 甲醛对SH-SY5Y细胞迁移能力的影响
        2. 甲醛对SH-SY5Y细胞活性的影响
        3. 甲醛促进SH-SY5Y细胞凋亡
        4. 甲醛对SH-SY5Y细胞炎性因子的影响
        5. 甲醛促进SH-SY5Y细胞超微结构的损伤
        6. 甲醛上调SH-SY5Y细胞磷酸化tau蛋白及线粒体裂解相关蛋白
    讨论
    小结
第二部分 甲醇致恒河猴认知障碍模型的建立与相关机制研究
    前言
    材料和方法
        1. 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要抗体
            1.4 主要仪器设备
            1.5 主要耗材
        2. 实验方法
            2.1 恒河猴分组与处理
            2.2 行为学训练及实验
            2.3 恒河猴标本采集(血液、脑脊液、尿液及粪便)
            2.4 尿液甲醛含量检测
            2.5 病理学方法检测
            2.6 炎性多因子检测
            2.7 免疫印迹法检测脑组织蛋白表达
            2.8 恒河猴肠道微生物菌群检测
            2.9 恒河猴尿液代谢组学检测
        3. 统计方法
    结果
        1. 行为学结果
            1.1 VSDRT检测到恒河猴记忆能力下降
            1.2 空间识别转换任务结果
            1.3 ORT实验检测到恒河猴认知能力下降
            1.4 OR实验检测到恒河猴认知能力下降
            1.5 Viewpoint测试检测到恒河猴运动量的增加
            1.6 Viewpoint测试未检测到恒河猴睡眠障碍
        2. 病理学检测结果
        3. 尿液甲醛含量检测结果
        4. 炎性多因子检测结果
        5. 血常规及生化、便常规及镜检检测结果
        6. 免疫印迹检测结果
        7. 恒河猴肠道微生物菌群检测结果
            7.1 物种相对丰度分析
            7.2 组间差异物种分析
            7.3 组间肠道菌群差异分析(T-test检验法)
        8. 恒河猴尿液代谢组学检测结果
            8.1 恒河猴尿液差异代谢物分析
            8.2 恒河猴尿液差异代谢物KEGG通路分析
    讨论
    小结
参考文献
文献综述
    参考文献
个人简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]神经生长因子对低氧缺血新生鼠纹状体内胆碱能神经元的保护作用[J]. 于晓虹,华仲慰,李玉书.  生理学报. 1993(04)



本文编号：3696754