结核分枝杆菌蛋白Rv2986c的生物信息学分析及原核表达

发布时间：2022-12-04 13:41

　　目的分析结核分枝杆菌蛋白Rv2986c的结构与功能,并进行原核表达。方法从NCBI Genbank数据库获取Rv2986c蛋白氨基酸序列,利用ExPASY ProtParam、Protscaleon expasy、TMHMM Server v.2.0以及SOPMA等软件对Rv2986c蛋白的生物学性质进行分析。用pGEX-6p-1-Rv2986c重组质粒转染大肠埃希菌（E.coil）BL21 （DE3）中表达Rv2986c,并使用GST亲和层析柱进行纯化。结果结核分枝杆菌Rv2986c蛋白由214个氨基酸组成,分子式为C₉₇₅H₁₇₀₇N₃₁₉O₂₆₆S₁,等电点（pI）为11.95,属于稳定、亲水性蛋白,无跨膜区;二级结构α-螺旋（Hh）占51.40%,无规则卷曲（Cc）占35.05%。重组质粒pGEX-6p-1-Rv2986c转染DE3后表达相对分子质量约为51×10~3的重组蛋白Rv2986c,经GST亲和层析柱纯化得到单一电泳条带的目的蛋白。结论生物信息学方法预测了结核... 

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 Rv2986c蛋白的生物信息学分析
            2.1.1 Rv2986c蛋白的一般理化性质分析
            2.1.2 Rv2986c蛋白的疏水性分析
            2.1.3 Rv2986c蛋白的跨膜区预测
            2.1.4 Rv2986c蛋白的二级结构预测
            2.1.5 Rv2986c蛋白的抗原性鉴定
        2.2 Rv2986c蛋白的原核表达及纯化
            2.2.1 pGEX-6p-1-Rv2986c重组质粒的酶切验证
            2.2.2 GST-Rv2986c重组蛋白的表达
            2.2.3 GST-Rv2986c重组蛋白的纯化
结果
    1 Rv2986c蛋白的生物信息学分析
        1.1 Rv2986c蛋白的一般理化性质
        1.2 Rv2986c蛋白的疏水性
        1.3 Rv2986c蛋白的跨膜区
        1.4 Rv2986c蛋白的二级结构
        1.5 Rv2986c蛋白的抗原性
    2 Rv2986c蛋白的原核表达及纯化
        2.1 pGEX-6p-1-Rv2986c原核表达载体的验证
        2.2重组蛋白的诱导表达
        2.3 重组蛋白的亲和纯化
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]炎症小体在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展[J]. 刘丽婷,吴利先,王国富.  中国病原生物学杂志. 2019(07)
[2]结核分枝杆菌Rv2986c对小鼠树突状细胞成熟和功能的影响[J]. 孙妍,王心倩,吴启航,赵隆麒,李海波,占卫红,张舒林,余晓丽.  免疫学杂志. 2017(12)
[3]结核分枝杆菌感染与巨噬细胞凋亡的免疫机制研究进展[J]. 师清博,赵明明,王春凤,钱爱东.  中国兽医学报. 2017(09)
[4]结核病细胞免疫特征研究进展[J]. 李丽.  中国免疫学杂志. 2017(06)
[5]结核分枝杆菌与巨噬细胞相互作用的研究进展[J]. 王旭东,吴利先.  中国病原生物学杂志. 2015(06)
[6]结核病疫苗研制的免疫优化策略及新疫苗研究进展[J]. 范小勇,李忠明,朱亚峰.  中华微生物学和免疫学杂志. 2013 (01)
[7]T淋巴细胞亚群在结核感染免疫反应中的作用[J]. 张慧洁,陈兰举,陈名武.  实用儿科临床杂志. 2006(19)

博士论文
[1]结核抗原持续刺激致T细胞耗竭实验研究及亚单位疫苗LT70-DPC的研发[D]. 刘勋.兰州大学 2016



本文编号：3708371