Wip1/PP2A通路调控小鼠间充质干细胞成脂肪细胞分化的实验研究

发布时间：2023-04-23 15:22

　　目的探究野生型p53诱导磷酸酶1(Wip1)基因调控小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)成脂肪细胞分化的作用与调控机制。方法分离培养Wip1基因敲除小鼠的MSC,观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表型和体外诱导分化鉴定MSC。利用油红O染色和实时荧光定量PCR(RT-PCR)比较野生型MSC(WT-MSC)和Wip1敲除MSC(Wip1^-/-MSC)成脂分化后的脂滴数和成脂关键转录因子的表达。Western印迹(WB)检测脂肪细胞分化关键蛋白蛋白质磷酸酶2A(PP2A)的表达。分别收集MSC成脂诱导分化后第0、2、4和5天样本,RT-PCR检测成脂关键转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)与PP2A的表达相关性。构建EGFP-Wip1质粒转染至293T细胞,WB检测过表达Wip1后细胞表达PP2A的差异。采用si RNA-PP2A瞬时转染MSC,检测PP2A敲低后PPARγ在MSC中的表达。结果分离培养的细胞形态呈成纤维样,细胞表型为Sca-1⁺CD90⁺CD105⁺CD29⁺

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料和方法
     1.1 材料
         1.1.1 实验动物
         1.1.2 细胞
         1.1.3 药物与试剂
     1.2 方法
         1.2.1 小鼠骨实质来源MSC的分离培养
         1.2.2 MSC成脂肪诱导及油红O染料染色
         1.2.3 RNA提取与RT-PCR检测
         1.2.4 流式细胞术检测MSC细胞表型
         1.2.5 细胞转染
         1.2.6 Western印迹检测
     1.3 统计学分析
2结果
    2.1 WT-MSC和Wip1-/-MSC分离培养与鉴定
    2.2 Wip1-/-MSC向脂肪细胞分化能力降低
    2.3 Wip1参与调控脂肪细胞分化关键调节因子PP2A的表达
    2.4 PP2A与PPARγ在MSC成脂分化过程中的相关性检测
    2.5 Wip1通过PP2A影响PPARγ的表达
3讨论



本文编号：3799972