艾滋病分支肽疫苗的临床前免疫原性评价及rAAV8介导HIV-1广谱中和抗体的构建与包装

发布时间：2023-06-06 19:44

　　艾滋病是一种致死率极高的重大传染类疾病,病因是感染了人类免疫缺陷病毒(HIV),因其感染蔓延范围广、病毒传播速度快等特点,对人类健康有着极为严重的影响。当前对艾滋病的治疗方式主要是从尽可能降低HIV病毒载量和对患者自身的免疫功能进行重建及维持这两个方面进行研究。目前可以实现最大限度降低患者体内病毒载量的疗法就是鸡尾酒疗法,但该疗法极易产生耐药、有较大副作用、仍有较高的病死率等诸多缺点。因而,一直以来疫苗都是研究人员防治艾滋病的重点研究方向。研究人员从艾滋病感染者中的精英控制者体内分离出数百种具有交叉保护活性的广谱中和抗体。广谱中和抗体可以中和多种型别的艾滋病病毒,清除游离的病毒或是已被感染病毒的细胞。因而广谱中和抗体能有效抑制病毒,并控制艾滋病的发展。因此,对广谱中和抗体进行深入研究是今后开发艾滋病疫苗的重要方向之一。通过主动免疫疗法或被动免疫疗法来促使机体中的广谱中和抗体处于较高水平,是目前设计开发艾滋病疫苗的重要策略。第一部分:艾滋病分支肽疫苗的临床前免疫原性评价课题组前期研究筛选并确定了基于HIV-1 MPER的线性表位4E10,搭载四分支肽载体设计免疫原,辅以油佐剂,4E10-...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
abstract
第一部分 艾滋病分支肽疫苗的临床前免疫原性评价
    第一章 绪论
        1.1.1 艾滋病概述
            1.1.1.1 艾滋病简介
            1.1.1.2 艾滋病起源
        1.1.2 HIV概述
            1.1.2.1 HIV简介
            1.1.2.2 HIV的分类
            1.1.2.3 HIV-1 的形态结构
            1.1.2.4 HIV-1 的感染机制
        1.1.3 艾滋病疫苗
            1.1.3.1 艾滋病的流行状况
            1.1.3.2 艾滋病的治疗方式
            1.1.3.3 艾滋病疫苗发展的必要性
            1.1.3.4 艾滋病疫苗的发展现状
        1.1.4 广谱中和抗体的选择
        1.1.5 疫苗载体的选择
        1.1.6 艾滋病疫苗临床现状
            1.1.6.1 国内外疫苗临床试验现状
            1.1.6.2 课题组研究进展
        1.1.7 临床前试验所采用的实验动物
        1.1.8 立题依据及实验方案
            1.1.8.1 立题依据
            1.1.8.2 实验方案
    第二章 实验仪器、材料与实验方法
        1.2.1 实验仪器、材料
            1.2.1.1 实验仪器
            1.2.1.2 实验试剂
            1.2.1.3 抗体
            1.2.1.4 细胞
            1.2.1.5 实验相关用品
            1.2.1.6 试验品
            1.2.1.7 实验动物
        1.2.2 实验试剂配制
            1.2.2.1 细胞实验试剂
            1.2.2.2 ELISA试剂
            1.2.2.3 SDS-PAGE试剂
            1.2.2.4 Western Blot试剂
            1.2.2.5 Dot Blot试剂
        1.2.3 实验方法
            1.2.3.1 分支肽疫苗免疫原
            1.2.3.2 动物实验策略
            1.2.3.3 ELISA
            1.2.3.4 包装及收取HIV-1 假病毒
            1.2.3.5 SDS-PAGE
            1.2.3.6 Western blot
            1.2.3.7 TCID50法
            1.2.3.8HIV-1 假病毒中和实验
            1.2.3.9 Dot blot
            1.2.3.10 统计学分析
    第三章 实验结果
        1.3.1 疫苗对食蟹猴的免疫评价
            1.3.1.1 食蟹猴个体转阳率
            1.3.1.2 食蟹猴结合抗体效价
            1.3.1.3 食蟹猴抗体中和活性
        1.3.2 疫苗对BALB/c小鼠的免疫评价
            1.3.2.1 BALB/c小鼠个体转阳率
            1.3.2.2 BALB/c小鼠结合抗体效价
            1.3.2.3 BALB/c小鼠抗体中和活性
            1.3.2.4 结合抗体在BALB/c小鼠组织的分布
    第四章 讨论
第二部分 rAAV8 介导HIV-1 广谱中和抗体的构建与包装
    第一章 绪论
        2.1.1 广谱中和抗体
            2.1.1.1 中和抗体10E8
            2.1.1.2 中和抗体NIH45-46
            2.1.1.3 中和抗体PG9
        2.1.2 被动免疫疗法
        2.1.3 腺相关病毒载体
        2.1.4 立题依据及实验方案
            2.1.4.1 立题依据
            2.1.4.2 实验方案
    第二章 实验器材与实验方法
        2.2.1 实验器材
            2.2.1.1 实验仪器
            2.2.1.2 实验试剂
            2.2.1.3 细胞
            2.2.1.4 质粒及菌种
            2.2.1.5 酶
            2.2.1.6 试剂盒
            2.2.1.7 实验相关用品
            2.2.1.8 引物合成
        2.2.2 实验试剂配制
            2.2.2.1 大肠杆菌培养试剂
            2.2.2.2 质粒构建试剂
        2.2.3 实验方法
            2.2.3.1 构建质粒
            2.2.3.2 酶切载体质粒
            2.2.3.3 PCR
            2.2.3.4 载体片段和目的基因片段连接
            2.2.3.5 质粒转化
            2.2.3.6 单克隆培养、质粒小提
            2.2.3.7 rAAV的包装
            2.2.3.8 rAAV的收取与纯化
            2.2.3.9 SDS-PAGE电泳
    第三章 实验结果
        2.3.1 质粒构建
            2.3.1.1 酶切载体质粒
            2.3.1.2 PCR产物
            2.3.1.3 载体片段和目的基因片段连接
        2.3.2 重组腺相关病毒包装验证
            2.3.2.1 细胞转染
            2.3.2.2 SDS-PAGE检测衣壳蛋白及纯度
    第四章 讨论
结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3832098