重组金黄色葡萄球菌疫苗特异性人血清IgG抗体Luminex系统多重检测方法的建立及验证

发布时间：2023-06-10 11:55

　　目的建立重组金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)疫苗特异性人血清IgG抗体的Luminex系统多重检测方法,并进行验证。方法以重组SA疫苗所含的5种抗原(mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC)作为磁珠偶联蛋白,分别与相应磁珠偶联,加入参考血清(第3次免疫重组SA疫苗后21 d的志愿者血清,筛选出抗5种抗原特异性高效价血清8份,混合),37℃孵育;加入山羊F(ab′)2抗人IgG-Fc(PE),37℃孵育;用Luminex系统进行多重检测,并对偶联抗原浓度、孵育时间、二抗稀释度进行优化。同时分析5种抗原间的干扰情况,并验证方法学的特异性、准确性及精密性。结果 mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC最适偶联浓度分别为30、150、7.5、2.5、7.5μg/2.5 mil,最适一抗及二抗孵育时间均为30 min,最适二抗稀释度为1∶5 000。5种抗原间不存在明显的交叉表位,与特异的抗体反应过程无明显相互干扰。游离的重组蛋白对偶联抗原与抗体间反应的抑制率随着浓度的增加而增加,3种浓度的参考血清的回收率介于87.0%～120.8...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 参考血清
    1.2 包被抗原
    1.3 主要试剂及仪器
    1.4 方法的建立
    1.5 方法的优化
        1.5.1 偶联抗原浓度
        1.5.2 孵育时间
        1.5.3 二抗稀释度
    1.6 多重检测抗原间干扰试验
    1.7 方法的验证
        1.7.1 特异性
        1.7.2 准确性
        1.7.3 精密性
    1.8统计学分析
2 结果
    2.1 方法的优化结果
        2.1.1 最适偶联抗原浓度
        2.1.2 最适孵育时间
        2.1.3 最适二抗稀释度
    2.2 多重检测抗原间干扰分析
    2.3 方法的验证
        2.3.1 特异性
        2.3.2 准确性
        2.3.3 精密性
3 讨论



本文编号：3832840