VZV外膜蛋白E胞外区的原核表达及其免疫特性研究

发布时间：2023-12-27 18:47

　　水痘-带状疱疹病毒(VZV)是一种可以引起水痘和带状疱疹(HZ)的病原体,通过呼吸道和密切接触在人群中传播,可以引发水痘和带状疱疹两种不同临床症状的疾病。人群对该病毒易感性强,主动免疫是减轻带状疱疹疾病负担的重要手段。g E蛋白是VZV抗原性最强、含量最丰富的外膜蛋白,是目前制备带状疱疹亚单位疫苗重要的候选蛋白。该研究通过原核系统表达带状疱疹g E蛋白,筛选合适的佐剂为制备带状疱疹亚单位疫苗提供依据。构建大肠杆菌重组系统表达VZV外膜蛋白E胞外区,用镍离子螯合层析技术纯化目的蛋白,用铝佐剂和Poly I:C佐剂分别与重组蛋白混合后免疫小鼠,检测抗血清免疫效价及相关细胞因子含量来比较佐剂对小鼠免疫应答的影响。构建的大肠杆菌表达系统成功表达目的蛋白,其表达形式主要为包涵体,通过变性复性获得相对分子质量约为63 ku的目的蛋白。免疫后的小鼠产生高效价及高特异性的血清抗体,经检测铝佐剂和Poly I:C佐剂均有较强的的免疫增强效果,并有明显的剂量效应关系。铝佐剂对Th2型细胞因子(IL-5,IL-10)具有更强烈的刺激作用。而对于Th1型细胞因子IL-2的分泌促进,Poly I:C佐剂优于铝佐...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 目的基因的筛选、优化及化学合成
    1.3 重组质粒的提取，转化及表达鉴定
    1.4 重组蛋白诱导表达条件的优化
    1.5 包涵体蛋白的纯化及复性
    1.6 小鼠免疫及免疫佐剂的比较
2 结果
    2.1 目的基因的筛选，优化及合成
    2.2 重组质粒的鉴定及高表达菌株的筛选
    2.3 重组蛋白诱导条件的比较
    2.4包涵体蛋白的纯化
    2.5 小鼠血清抗体特异性鉴定
    2.6 小鼠血清抗体效价测定
    2.7 双抗体夹心法测定小鼠血清细胞因子
3 讨论



本文编号：3875701