免疫相关GTP结合蛋白2的亚细胞定位分析

发布时间：2024-02-01 08:40

　　目的:对免疫相关GTP结合蛋白2(GTPase of immunity-associated protein 2,GIMAP2)进行亚细胞定位分析,为深入研究GIMAP2蛋白的功能奠定基础。方法:使用国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库查询获取GIMAP2的蛋白序列,再利用生物信息学在线分析工具对GIMAP2蛋白的跨膜结构、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)、核输出信号(nuclear export signal,NES)及亚细胞定位进行分析预测。采用PCR技术扩增GIMAP2基因片段,并插入至p QCXIP-mCherry-N1表达载体,用氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆。测序正确的重组质粒p QCXIP-GIMAP2-mCherry经过提取、纯化步骤后,与逆转录病毒包装质粒VSVG、Gag/Pol在脂质体介导下共同转入HEK293FT细胞中进行病毒包装。转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436。使用免疫荧光染色方法检测内、外...

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【部分图文】：

图1GIMAP2蛋白生物信息学分析

根据pQCXIP-GIMAP2-mCherry表达载体的构建示意图(图2A)，以pBABE-GIMAP2-EGFP质粒为模板，GIMAP2-F、GIMAP2-R为引物扩增GIMAP2基因片段，其PCR产物大小为1033bp。DNA凝胶电泳结果显示，与预期大小相符(图2B)。....

图2pQCXIP-GIMAP2-mCherry重组载体构建过程

图1GIMAP2蛋白生物信息学分析2.3内源性、外源性GIMAP2蛋白在MDA-MB-436细胞内共定位

图3内源性、外源性GIMAP2蛋白在MDA-MB-436细胞内共定位

将稳定表达GIMAP2-mCherry融合蛋白的MDA-MB-436细胞以1.0×105个/孔接种在含盖玻片的12孔板内，37℃培养12h。经固定、透膜、封闭、兔抗人GIMAP2抗体免疫染色等步骤后，激光共聚焦显微镜下观察GIMAP2蛋白的定位情况，结果显示抗体标记的GIMAP....

图4GIMAP2-mCherry融合蛋白定位于细胞中内质网和脂滴

综上所述，本研究对GIMAP2蛋白的亚细胞定位分析为我们后续探索GIMAP2蛋白功能及相应机制提供了实验基础。

本文编号：3891872