慢病毒介导shRNA质粒TRPV2和TRPV4基因双沉默模式在大鼠脊柱侧弯模型椎间盘退变中的实验研究

发布时间：2024-02-23 09:49

　　目的探究慢病毒介导shRNA质粒TRPV2和TRPV4基因双沉默模式在大鼠脊柱侧弯模型椎间盘退变中的作用。方法本研究采用经典的双足大鼠脊柱侧弯模型构建的方法。根据siRNA干扰原理,构建shRNA-TRPV2和shRNA-TRPV4干扰载体,根据实验目的将SD大鼠分成4组,即模型组,shRNA-TRPV2组,shRNA-TRPV4组和双基因沉默组。利用X射线对上述动物模型进行摄片,利用Masson染色检测成骨组织,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞活性,利用RT-PCR检测BMP,BGP和ALP的mRNA表达水平。结果 shRNA-TRPV2的慢病毒转染效率较高,为(92.3±2.7)%,shRNA-TRPV4的慢病毒转染效率较高,为(91.5±3.3)%,影像摄片结果显示,双基因沉默组大鼠模型Cobb角度相较于模型组具有明显改善(P<0.05)。Masson染色结果显示,双基因沉默组大鼠模型新生成骨组织明显多于模型组(P<0.05)。TRAP染色结果显示,双基因沉默组大鼠模型破骨细胞活性及数量明显多于模型组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,双基...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验动物和主要试剂
    1.2 脊柱侧弯鼠模型的构建和实验分组
    1.3 shRNA-TRPV2干扰载体和shRNA-TRPV4干扰载体的构建
    1.4 RT-qPCR检测BMP,BGP和ALP的mRNA表达水平
    1.5 各组大鼠Masson染色
    1.6 各组大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色
    1.7 统计学分析
2 结果
    2.1 shRNA-TRPV2慢病毒载体的构建和转染
    2.2 shRNA-TRPV4慢病毒载体的构建和转染
    2.3 影像学结果
    2.4 Masson染色结果
    2.5 TRAP染色结果
    2.6 RT-qPCR检测成骨相关组织
3 讨论



本文编号：3907412