双链RNA饲喂干扰家蝇CYP6D1基因表达方法的建立

发布时间：2024-03-01 18:03

　　目的利用饲喂双链RNA(dsRNA)对家蝇拟除虫菊酯抗性相关基因CYP6D1的表达进行干扰,并对干扰效果进行评价。方法化学合成家蝇CYP6D1基因,连接入载体质粒L4440,转化入大肠埃希菌DH5α扩增质粒。抽提质粒,将其转化到大肠埃希菌HT115(DE3),并在异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下表达CYP6D1基因的dsRNA。将含有CYP6D1基因dsRNA的HT115(DE3)饲喂家蝇,72 h后通过荧光相对定量技术评价家蝇体内CYP6D1基因的表达变化。未进行质粒L4440转化的大肠埃希菌菌株HT115(DE3)饲喂家蝇作为对照。结果采用2^-△△Ct法对对照组和处理组的mRNA相对表达量进行定量。目的基因和内参基因标准曲线R²值均>0.99,扩增效率M值均在0.90～1.10之间。与对照组相比,处理组CYP6D1基因mRNA相对表达量下降了40.1%,两者之间差异有统计学意义(t=-11.377,P=0.008)。结论初步建立了饲喂dsRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因CYP6D1表达进行干扰的方法,在mRNA水平上实现基...

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图1荧光定量标准曲线

取单只抗性种群家蝇提取总RNA，经反转录获得cDNA模板。按100、10-1、10-2、10-3、10-4进行梯度稀释，稀释后的模板通过荧光定量PCR扩增CYP6D1基因及gapdh基因。根据所得达到设定荧光阈值的循环数与稀释度的常用对数绘制标准曲线，结果显示2个基因标准曲线R2....

本文编号：3915610