胎盘间充质干细胞外泌体对高糖培养的成纤维细胞衰老的影响

发布时间：2024-03-03 11:24

　　目的探索高糖(high glucose, HG)促进体外培养的人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts, HDFs)的衰老条件,建立高糖老化模型;观察胎盘间充质干细胞来源的外泌体(exosomes, Exos)对高糖培养的成纤维细胞增殖、迁移及衰老的影响。方法分离人包皮组织的HDFs。实验分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG1组(26 mmol/L葡萄糖)、HG2组(35 mmol/L葡萄糖)。CCK-8试剂盒检测各组细胞在1、3、5、7 d的增殖情况;各组培养7 d后进行划痕实验,观察各组HDFs在24 h内的迁移率;2′,7′二氯荧光素二醋酸(DCFH)法检测各组培养7 d后细胞内活性氧簇(ROS)水平;细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测各组培养7 d后β-半乳糖苷酶活性。体外培养胎盘间充质干细胞(placenta mesenchymal stem cells, PMSCs),差速高速离心法分离Exos。将上述培养的HDFs分为3组:HG2组(35 mmol/L葡萄糖)、HG2+低浓度Exos(5μg/mL)组、HG2+高浓度Exos...

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【部分图文】：

图1高糖对HDFs增殖的影响

如图2B所示,培养7d后,与正常对照组相比,HG1组细胞内产生ROS水平差异无统计学意义,而HG2组HDFs内ROS水平显著升高(P<0.01),提示35mmol/L的高糖环境可刺激HDFs细胞内的ROS水平升高,从而诱发细胞衰老。镜下观察细胞衰老β半乳糖苷酶染色结果(图2D....

图2高糖对HDFs迁移及衰老的影响

镜下观察细胞衰老β半乳糖苷酶染色结果(图2D),HG1组HDFs无明显变化,染色率与正常对照组相比差异无统计学意义。但用HG2培养HDFs7d后,细胞逐渐出现老化表现,镜下可见明显蓝绿色细胞染色(P<0.01)。衰老相关β半乳糖苷酶染色提示35mmol/L的高糖环境可加速成....

图3PMSCs及其培养上清液来源Exos鉴定

透射电子显微镜下Exos为大小分布均匀的杯状双层膜性囊泡(图3D)。纳米颗粒跟踪分析仪检测Exos粒径为(118.9±49.5)nm(图3E)。Westernblot检测Exos膜表面标志性蛋白CD9、CD63和CD81表达均呈阳性(图3F)。Exos内化实验结果显示,经共聚焦....

图4Exos对高糖培养的HDFs增殖能力、细胞周期及迁移能力的影响

划痕实验结果显示(图4D、E),HG2+低浓度Exos组与未处理组相比,迁移率差异无统计学意义。但HG2+高浓度Exos组的细胞迁移率显著增加(P<0.01)。细胞内ROS产生量检测结果显示,HG2+低浓度Exos组未能有效抑制细胞内ROS的产生。然而HG2+高浓度Exos组可显....

本文编号：3917713