基于DNA双链断裂修复机制的CRISPR/Cas9技术改良及小鼠原发性肝癌模型建立研究

发布时间：2024-03-05 04:41

　　本论文包括两个相对独立的课题研究内容,一是操纵精准型非同源末端连接(non homologous end joining,NHEJ)实现 CRISPR/Cas9 介导的高效精准删除;二是基于CRISPR/Cas9基因敲除技术建立小鼠原发性肝癌模型。课题一:前期研究中发现在I-SceI诱导DNA双链断裂(double strand break,DSB)修复中精准型NHEJ(accurate NHEJ,accNHEJ)占据总NHEJ 一半以上比例,我们推测CRISPR/Cas9诱导的NHEJ也可能大部分是精准型NHEJ。本研究中,利用配对sgRNA技术与Cas9在内源基因组上诱导两个临近DSB损伤,并评估了随后修复中CRISPR/Cas9诱导的NHEJ,发现在人和小鼠基因组中发生的NHEJ也有50%左右属于精准型NHEJ。利用该技术进一步研究发现类似于I-SceI诱导的NHEJ调控,NHEJ核心因子XRCC4推动了 CRISPR/Cas9诱导的NHEJ修复进程;与XRCC4敲除时相比较,XRCC4在其中抑制突变型NHEJ,而且突变型NHEJ中删除插入(insertion/deletion,...

【文章页数】：152 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
英文缩略语表
前言
第一部分 操纵精准型非同源末端连接实现CRISPR/Cas9介导的高效精准删除
    1. 引言
    2. 材料与方法
    3. 结果
    4. 讨论
第二部分 基于CRISPR/Cas9基因敲除技术建立小鼠原发性肝癌模型
    1. 引言
    2. 材料与方法
    3. 结果
    4. 讨论
全文总结
参考文献
综述
    参考文献
作者简历及在读期间取得的科研成果



本文编号：3919699