通过矿化提高蛋白疫苗稳定性的研究

发布时间：2024-04-15 23:11

　　目的:通过原位矿化的方式制备肺炎链球菌蛋白质的磷酸钙矿化颗粒,并评价其在蛋白酶和热处理后的稳定性。方法:通过分子克隆技术表达并纯化蛋白野生型溶血素(WT-PLY)和其无溶血活性突变体(ΔA146PLY),在富含Ca²⁺和PO₄^3-的弱碱性溶液(pH=7.5)中进行生物矿化,制备磷酸钙矿化的蛋白颗粒;通过TEM、FESEM、EDS等分析矿化颗粒的大小、形貌及表面成分;通过抗蛋白酶K降解实验、溶血实验等分析矿化疫苗的稳定性;通过体外细胞实验和体内动物实验评估热处理后矿化蛋白疫苗的保护效应。结果:在1 ml矿化体系中含有360μg蛋白、8.8μmol Ca²⁺、8.8μmol Mg²⁺和5.28μmol PO₄^3-的条件下,均可制备出WT-PLY和ΔA146PLY的矿化颗粒,BCA检测其包封率分别为44.4%和52.2%;矿化颗粒WT-PLY@CaP和ΔA146PLY@CaP在蛋白酶K处理15 min内其抗酶解活性高于其可溶性蛋白;矿化颗粒...

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【部分图文】：

图4WT-PLY@CaP和ΔA146PLY@CaP的FESEM图

图3WT-PLY@CaP和ΔA146PLY@CaP的TEM图2.3.2FESEM

图1蛋白WT-PLY和ΔA146PLY原核表达、纯化后SDS-PAGE分析

矿化结果显示:蛋白矿化后呈悬浊液,与蛋白溶液相比,呈现比较明显的半透明状(图2A、D)。分离矿化液上清和沉淀,进行SDS-PAGE,灰度分析结果显示WT-PLY@CaP上清中蛋白含量为51.3%,沉淀中为40.6%;ΔA146PLY@CaP蛋白含量为51.6%,沉淀中为44.7%....

图2矿化后蛋白纳米颗粒的表达效果及SDS-PAGE、BCA结果

图1蛋白WT-PLY和ΔA146PLY原核表达、纯化后SDS-PAGE分析2.3矿化纳米颗粒的生物表征

图9矿化蛋白热处理后小鼠的免疫保护效应

图8不同温度处理ΔA146PLY和ΔA146PLY@CaP后刺激巨噬细胞分泌细胞因子IL-6和TNF-α2.4.2溶血实验

本文编号：3956084