白色念珠菌谷氧还蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备

发布时间：2024-06-11 01:15

　　目的纯化白色念株菌(Candida albicans)谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)并制备多克隆抗体。方法从NCBI网站搜索白色念株菌Grx蛋白序列,采用利用生物信息学方法分析其生物学特性。以白色念珠菌DNA为模板,PCR扩增Grx基因,双切后与质粒pET28a相连,连接产物pET28a-Grx转入表达菌BL21(DE3),使用IPTG诱导目的蛋白表达,使用亲和层析纯化目的蛋白。用Grx蛋白免疫小鼠,制备抗血清,进行Western blot和ELISA检测。结果白色念珠菌Grx蛋白含有一个CXXC结构域,属跨膜蛋白。其二级结构中58.8%的氨基酸为α-螺旋,12.6%为β片层,23.5%为无规卷曲,三级结构与酵母Grx蛋白结构相似。Grx蛋白具有多个B细胞表位。获得Grx基因并成功构建重组质粒pET28a-Grx,转染DE3后表达15.2×103的重组蛋白。用纯化的重组Grx蛋白免疫小鼠,获得的多克隆抗体ELISA效价为1:10 240。结论成功表达白色念株菌Grx蛋白并制备了高滴度的多克隆抗体,为Grx的活性研究奠定了实验基础。

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【部分图文】：

图1白色念珠菌Grx蛋白与大肠埃希菌、酵母和拟南芥Grx蛋白的同源性分析（框内为CXXC活性中心）

将白色念株菌的Grx蛋白与大肠埃希菌（E.coli），酵母（S.cerevisiae）和拟南芥（A.thaliana）的Grx蛋白进行序列比对分析，其中与酵母Grx蛋白的同源性较高，为51.9%。Grx蛋白的CXXC活性中心高度保守，白色念珠菌的Grx蛋白CXXC结构域位于该蛋白....

图2白色念株Grx蛋白的跨膜结构域

SignalIP5.0预测白色念株菌Grx无信号肽，TMPRED软件预测该蛋白的5-26位氨基酸为跨膜区（图2）。利用SOPMA软件分析Grx蛋白二级结构，其58.8%的氨基酸为α-螺旋，12.6%为β片层，23.5%为无规卷曲（图3）。

图3白色念珠菌Grx蛋白二级结构

利用SOPMA软件分析Grx蛋白二级结构，其58.8%的氨基酸为α-螺旋，12.6%为β片层，23.5%为无规卷曲（图3）。利用酵母的Grx蛋白三级结构（3ctg.1.A）为模板，登陆SwissModel网站模拟得到白色念株菌Grx蛋白的三级结构，结果见图4。

图4白色念珠菌Grx蛋白的三级结构

利用酵母的Grx蛋白三级结构（3ctg.1.A）为模板，登陆SwissModel网站模拟得到白色念株菌Grx蛋白的三级结构，结果见图4。利用iedb网站预测Grx蛋白的B细胞表位，结果见图5。Grx蛋白有4个可能的B细胞表位。B细胞表位的氨基酸酸组成及位置见表1。

本文编号：3992180