急性肝衰竭肝性脑病模型中TNF-α对脑组织氨转运体表达的影响
发布时间：2025-03-18 22:42
目的:急性肝衰竭（ALF）可由多种原因引起的一种综合征,表现为大量肝细胞坏死及（或）严重肝功能障碍,短期内患者可发生肝性脑病。ALF是严重危害人类健康的疾病。肝性脑病（HE）是ALF晚期最常见的致死性并发症,其发病机制迄今尚未完全阐明,目前已提出多种学说。其中高血氨被认为是最关键的因素之一。氨是一种弱碱,在生理性pH 7.4时,氨发生质子化,98%以上以NH4+的形式存在。游离的NH3是脂溶性的,可以被动通过细胞膜。近年研究发现,氨的转运,除了伴随着浓度梯度的被动扩散之外,还有NH4+/NH3的主动转运蛋白参与其中。哺乳动物中的氨转运蛋白,即Rhesus相关糖蛋白是近年来研究较多的氨转运体,尤其RhBG/Rhbg和RhCG/Rhcg在肾脏氨分泌中的作用已通过基因敲除等实验得出初步结论。而ALF导致的HE中,尚不清楚脑组织中是否存在NH4+/NH3的主动转运蛋白。本研究通过建立ALF所致肝性脑病...
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分：急性肝衰竭肝性脑病模型中脑组织氨转运体的表达
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验药物
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 主要实验器材
2.2 动物分组及模型制备
2.3 血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)检测
2.4 肝组织病理学检查
2.5 实验动物不同时间点血氨及脑实质氨水平检测
2.5.1 绘制标准曲线
2.5.2 样本准备
2.5.3 加入反应混合物
2.5.4 测量
2.6 应用Western blot方法观察脑组织氨转运体蛋白的表达
2.6.1 脑组织总蛋白提取
2.6.2 BCA法测脑组织蛋白浓度
2.6.3 Western blot方法检测脑组织氨转运体蛋白的表达
2.7 逆转录-聚合酶链式反应（reverse transcription PCR，RT-PCR）检测脑组织Rhbg、Rhcg基因m RNA的相对含量
2.7.1 脑组织RNA的提取
2.7.2 逆转录合成c DNA
2.7.3 PCR（三步法）
2.7.4 琼脂糖凝胶电泳：
2.8 统计学处理
3 结果
3.1 各组动物给药后反应及死亡情况
3.2 血清ALT水平
3.3 肝脏HE染色结果
3.4 各组不同时间点小鼠血氨及脑组织氨水平测定
3.5 脑组织氨转运体蛋白表达情况
3.6 脑组织氨转运体m RNA表达变化
4 讨论
5 结论
第二部分：肿瘤坏死因子-α对脑组织氨转运体表达的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物与细胞
2.1.2 实验药物
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 主要实验器材
2.2 动物分组及模型制备
2.3 血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)检测
2.4 血清肿瘤坏死因子-α ( TNF-α )水平测定
2.5 肝组织病理学检查
2.6 血氨及脑组织氨水平检测
2.6.1 绘制标准曲线
2.6.2 样本准备
2.6.3 加入反应混合物
2.6.4 测量
2.7 TNF-α对人脑微血管内皮细胞中氨转运体表达的影响
2.8 Western blot方法分析脑组织或HBMEC中氨转运体蛋白的相对表达
2.8.1 脑组织或HBMEC总蛋白提取
2.8.2 BCA法测蛋白浓度
2.8.3 Western blot方法检测脑组织或HBMEC中氨转运体蛋白相对表达
2.9 逆转录-聚合酶链式反应（reverse transcription PCR，RT-PCR）检测脑组织及HBMEC中Rhbg/Rh BG、Rhcg/Rh CG mRNA的相对含量
2.9.1 脑组织或HBMEC中总RNA的提取
2.9.2 逆转录合成c DNA
2.9.3 PCR（三步法）
2.9.4 琼脂糖凝胶电泳
2.10 免疫组化( Immunohistochemistry, IHC )及免疫荧光法(Immunofluorescent assays, IFA)观察Rhcg蛋白在小鼠脑组织中的表达部位
2.11 统计学处理
3 结果
3.1 各组动物给药后反应及死亡率情况
3.2 血清ALT水平
3.3 D-Gal N联合LPS组及对照组血清TNF-α水平
3.4 肝脏HE染色结果
3.5 血氨及脑组织氨水平
3.6 脑组织氨转运体蛋白表达情况
3.7 脑组织或HBMEC中氨转运体m RNA相对表达
3.8 脑组织中氨转运体Rhcg的表达部位
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：4036285
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分：急性肝衰竭肝性脑病模型中脑组织氨转运体的表达
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验药物
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 主要实验器材
2.2 动物分组及模型制备
2.3 血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)检测
2.4 肝组织病理学检查
2.5 实验动物不同时间点血氨及脑实质氨水平检测
2.5.1 绘制标准曲线
2.5.2 样本准备
2.5.3 加入反应混合物
2.5.4 测量
2.6 应用Western blot方法观察脑组织氨转运体蛋白的表达
2.6.1 脑组织总蛋白提取
2.6.2 BCA法测脑组织蛋白浓度
2.6.3 Western blot方法检测脑组织氨转运体蛋白的表达
2.7 逆转录-聚合酶链式反应（reverse transcription PCR，RT-PCR）检测脑组织Rhbg、Rhcg基因m RNA的相对含量
2.7.1 脑组织RNA的提取
2.7.2 逆转录合成c DNA
2.7.3 PCR（三步法）
2.7.4 琼脂糖凝胶电泳：
2.8 统计学处理
3 结果
3.1 各组动物给药后反应及死亡情况
3.2 血清ALT水平
3.3 肝脏HE染色结果
3.4 各组不同时间点小鼠血氨及脑组织氨水平测定
3.5 脑组织氨转运体蛋白表达情况
3.6 脑组织氨转运体m RNA表达变化
4 讨论
5 结论
第二部分：肿瘤坏死因子-α对脑组织氨转运体表达的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 实验动物与细胞
2.1.2 实验药物
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 主要实验器材
2.2 动物分组及模型制备
2.3 血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)检测
2.4 血清肿瘤坏死因子-α ( TNF-α )水平测定
2.5 肝组织病理学检查
2.6 血氨及脑组织氨水平检测
2.6.1 绘制标准曲线
2.6.2 样本准备
2.6.3 加入反应混合物
2.6.4 测量
2.7 TNF-α对人脑微血管内皮细胞中氨转运体表达的影响
2.8 Western blot方法分析脑组织或HBMEC中氨转运体蛋白的相对表达
2.8.1 脑组织或HBMEC总蛋白提取
2.8.2 BCA法测蛋白浓度
2.8.3 Western blot方法检测脑组织或HBMEC中氨转运体蛋白相对表达
2.9 逆转录-聚合酶链式反应（reverse transcription PCR，RT-PCR）检测脑组织及HBMEC中Rhbg/Rh BG、Rhcg/Rh CG mRNA的相对含量
2.9.1 脑组织或HBMEC中总RNA的提取
2.9.2 逆转录合成c DNA
2.9.3 PCR（三步法）
2.9.4 琼脂糖凝胶电泳
2.10 免疫组化( Immunohistochemistry, IHC )及免疫荧光法(Immunofluorescent assays, IFA)观察Rhcg蛋白在小鼠脑组织中的表达部位
2.11 统计学处理
3 结果
3.1 各组动物给药后反应及死亡率情况
3.2 血清ALT水平
3.3 D-Gal N联合LPS组及对照组血清TNF-α水平
3.4 肝脏HE染色结果
3.5 血氨及脑组织氨水平
3.6 脑组织氨转运体蛋白表达情况
3.7 脑组织或HBMEC中氨转运体m RNA相对表达
3.8 脑组织中氨转运体Rhcg的表达部位
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
本文编号：4036285
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