鞘氨醇-1-磷酸受体-1结合肽的筛选及功能验证

发布时间：2017-06-22 19:01

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【摘要】：目的蛋白鞘氨醇-1-磷酸受体-1(sphingosine-1-phosphate receptor-1,S1P1)在血管新生中发挥着关键性作用,并在肿瘤细胞中高表达。研究通过筛选S1P1筛选胞外区结合的功能肽段,观察S1P1的抑制对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的影响。方法在大肠埃希菌BL21(DE3)中融合表达S1P1的胞外区1-46肽段,亲和纯化获得了GST-S1P11-46融合蛋白,并以此目的蛋白为靶标,采用固相包被的方法对噬菌体随机展示12肽库进行筛选,挑选有高亲和力的噬菌体,经测序得到阳性噬菌体的小肽序列;随后,将小肽偶连在匙孔蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)上,并通过Western blot、细胞免疫荧光、成管实验,观察偶联肽与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)表达的S1P1结合能力及对HUVEC管形成的影响,MTT检测偶联肽对肝癌细胞(human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)增殖的影响。结果获得了与S1P1有较高亲和力的2种12肽。细胞实验证实偶联肽能结合细胞表面的S1P1受体,而且2种偶联肽均能抑制HepG2的增殖,并抑制HUVEC细胞的成管行为。结论利用噬菌体肽库筛选技术,成功筛选出了具有抑制作用的S1P1结合肽。
【作者单位】： 武警后勤学院附属医院检验科;武警辽宁总队医院检验科;武警后勤学院附属医院脑系科中心;武警后勤学院附属医院药剂科;
【关键词】： 鞘氨醇--磷酸受体- 噬菌体展示肽 血管生成 偶联肽
【基金】：国家自然科学基金青年项目(11102235) 天津市自然科学基金重点项目(12JCZDJC24100)
【分类号】：R341
【正文快照】： 0引言鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是具有重要生理功能的一种膜磷脂类分解代谢产物[1]。S1P既是细胞内信号转导的第二信使分子,又可以分泌至细胞外,作为胞外信号分子,通过与细胞表面的特定受体结合,参与调控细胞的增殖、分化、抗凋亡、细胞迁移、血管生成等过

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本文编号：472741