DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立与过敏机制探讨及CD3ε免疫缺陷病临床、免疫学特征分析

发布时间：2017-06-23 03:01

  本文关键词：DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立与过敏机制探讨及CD3ε免疫缺陷病临床、免疫学特征分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立与过敏机制探讨目的:建立DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型并检测DOCK8缺陷哮喘小鼠与野生对照哮喘小鼠气道炎症反应、外周血以及脾内IgE+B细胞百分比,探讨IgE的变化在DOCK8缺陷小鼠哮喘模型过敏性炎症中的意义及与IL-21的关系。方法:将6周清洁级DOCK8 KO小鼠(C57BL/6)和野生小鼠(C57BL/6)随机分为实验组(KO-ova),野生对照组(WT-ova)、KO对照组(KO-con)和空白对照组(WT-con),实验组和野生对照组给予小剂量OVA致敏和激发,KO对照组和空白对照组用PBS代替。在最后1次激发后的24 h内检测4组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IgE绝对值、细胞总数及细胞分类计数;有创肺功能仪检测小鼠气道高反应性;HE染色制作小鼠肺组织病理切片,光镜下观察病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血和脾脏中IgE+B细胞百分比。实验组、野生对照组和KO对照组分别在第一次激发后前3天、后3天和全6天给予20ng/天IL-21治疗后重复观察以上指标。结果:哮喘模型实验组(KO-ova)BALF细胞总数(6.15±0.9,n=8,P0.05)明显高于其他3组(3.08±0.4,1.98±0.6,1.91±0.2,%,n=8,P0.05);嗜酸性粒细胞比例、气道高反应性与肺部炎症反应也相应增高;野生对照组(WT-ova)与KO对照组(KO-con)和空白对照组(WT-con)比,气道炎症反应有升高趋势,气道高反应性基本无改变;实验组(KO-ova)外周血及脾脏中IgE+B细胞明显高于其他3组(blood3.12±0.3 vs 1.12±0.11,1.25±0.3,0.59±0.05,spleen2.01±0.13 vs0.81±0.06,0.78±0.09,0.43±0.06,%,n=8,P0.05%,n=8,P0.05);而给予IL-21治疗后,除外气道高反应性,其他各项指标均降低且结果有统计学意义,其中治疗期为第一次激发后的前3天和全6天的小鼠治疗效果尤佳。结论:DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型建立成功,跟野生小鼠比DOCK8缺陷小鼠有哮喘易感性,且相同刺激条件下过敏性炎症更重,而该易感性可能与其体内IgE升高有关;IL-21治疗DOCK8缺陷哮喘小鼠可降低其IgE与炎症反应,其机制可能与IL-21 IgE抗体类别转换有关。第二部分:CD3ε缺陷致重症联合免疫缺陷病1例临床及免疫学特征分析目的:探讨1例由11q23染色体CD3E基因突变导致CD3ε缺陷重症联合免疫缺陷病临床特征及免疫表型。方法:收集近期就诊于重庆医科大学附属儿童医院的1例疑诊CD3ε缺陷致重症联合免疫缺陷病患儿外周血标本,提取外周血单个核细胞(PBMC)及核酸,CDR3扫描谱型技术分析T淋巴细胞受体(TCR)多样性,定量PCR检测TCR重排剪切环(TREC)含量,二代测序筛查免疫相关基因,一代测序验证。结果:TCR Vβ亚家族表现为单克隆或寡克隆峰提示TCR重组受限;定量PCR未检测到TREC含量提示TCR重组及T细胞胸腺输出严重受损;二代测序显示CD3E基因复合杂合突变,一代测序验证证实。结论:通过临床及免疫学分析、二代测序筛查及一代测序证实,确诊1例CD3E基因复合杂合突变致CD3ε缺陷重症联合免疫缺陷病,该病例罕见且临床与免疫学表型复杂,临床诊断存在困难,导致漏诊与延迟诊断,死亡率高且均为早期死亡,干细胞移植或基因治疗是其唯一的根治手段,因此提高临床工作者对本病的认识对于早期诊断与针对性治疗至关重要。
【关键词】：DOCK8缺陷 哮喘 IgE IL-21 重症联合免疫缺陷病 CD3ε缺陷 二代测序 精准医疗
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R725.6
【目录】：

• 英汉缩略词名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 第一部分：DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型建立及其过敏性炎症机制探讨12-39
• 前言12-14
• 1.材料和方法14-20
• 2.结果20-34
• 3.讨论34-36
• 4.结论36-37
• 参考文献37-39
• 第二部分：CD3ε 缺陷致重症联合免疫缺陷病临床及免疫学特征分析39-50
• 前言39
• 1.材料和方法39-42
• 2.结果42-45
• 3.讨论45-47
• 4.结论47-48
• 参考文献48-50
• 全文总结50-51
• 文献综述51-57
• 参考文献55-57
• 致谢57-58
• 攻读硕士学位期间研究成果及发表文章58

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本文编号：473720