抗冻蛋白TmAFP84在毕赤酵母中的表达

发布时间：2017-06-26 15:14

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【摘要】：目的通过对黄粉甲抗冻蛋白TmAFP84进行基因克隆、表达,获得目的蛋白。方法 PCR扩增目的 afp84基因,克隆到pUCm-T载体中测序并保存。通过双酶切将afp84基因定向重组到毕赤酵母表达载体pPIC9K中。醋酸锂转化法将重组质粒转化入毕赤酵母GS115,筛选出重组菌株。用0.5%甲醇诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和海波银染鉴定目的蛋白。结果经PCR扩增获得了目的基因片段afp84,克隆质粒pUCm-T与afp84重组获得了质粒pUCm-T-afp84。构建成功真核表达载体pPIC9K-afp84,目的抗冻蛋白TmAFP84经诱导后获得表达。结论真核表达载体pPIC9K-afp84成功构建,并大量表达出目的抗冻蛋白,为扩大生产规模及深入研究抗冻蛋白的性质和应用奠定基础。
【作者单位】： 南方医科大学附属郑州人民医院;
【关键词】： 聚合链式反应 抗冻蛋白 真菌表达 毕赤酵母
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 近年来,抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)的基础研究及其在生物技术应用领域的研究已经成为目前国际上一个比较热门的研究方向。Gabriel[1]等首次报道了在老鼠的心脏移植中,用抗冻蛋白低温保藏心脏从而成功地保护了心肌结构。以色列研究人员利用抗冻蛋白对哺乳动物的心脏

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