TRPC1缺失对小鼠空间记忆的影响及环境丰富的干预作用研究

发布时间：2017-06-29 00:16

  本文关键词：TRPC1缺失对小鼠空间记忆的影响及环境丰富的干预作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:经典瞬时受体电位I型通道(transient receptor potential channels 1,TRPC1)广泛表达于神经中枢,但其在脑神经的功能尚不清楚。本文旨在探索TRPC1缺失对小鼠空间记忆的影响及环境丰富(environmental enrichment,EE)的干预作用。方法:本研究选用3-5月龄的TRPC1敲除小鼠(TRPC1-/-)和野生型小鼠(wide-type,WT)。实验分为4组:未处理WT小鼠、环境丰富处理WT小鼠、未处理TRPC1-/-小鼠和环境丰富处理TRPC1-/-小鼠。环境丰富处理小鼠时间为6周。采用条件恐惧实验、Y迷宫实验和电跳台实验检测TRPC1缺失及环境丰富处理对小鼠的记忆的影响。通过荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)结合质谱分析的方法研究TRPC1缺失诱导小鼠记忆损伤的潜在分子机制及环境丰富的干预作用机制。免疫荧光组织化学、尼氏染色和TUNEL染色检测各组小鼠神经细胞丢失/凋亡变化。使用Western blot分析对蛋白质组学筛选出的差异蛋白进行验证。结果:条件恐惧实验、Y迷宫实验和跳台实验结果一致显示,TRPC1缺失可诱导小鼠空间记忆损伤,环境丰富可显著改善TRPC1-/-小鼠记忆损伤。2D-DIGE结合质谱分析的结果表明,与野生对照组相比,TRPC1-/-小鼠海马组织中共发现10个差异性表达蛋白。环境丰富处理的TRPC1-/-小鼠与未处理的TRPC1-/-小鼠相比,其海马组织中共有22个差异性表达的蛋白。其中,相比WT小鼠,电压依赖性阴离子选择通道蛋白2(Voltage-dependent anion-selective channel protein 2,VDAC 2)在TRPC1-/-小鼠中表达显著上调。相比TRPC1-/-小鼠,与记忆损伤相关的蛋白α-互联蛋白(α-internexin)和神经胶质成熟因子β(Glia maturation factor beta,GMF-β)在环境丰富处理的TRPC1-/-小鼠中显著降低。免疫荧光化学、尼氏染色和TUNEL均表明TRPC1缺失导致神经元丢失/凋亡。Western blot分析发现,α-internexin与GMF-β的表达水平改变,与2D-DIGE的结果一致。结论:综上结果表明,TRPC1缺失可诱导小鼠记忆损伤,并改变其海马组织中多种蛋白的表达,其机制可能是TRPC1缺失导致神经细胞丢失相关。环境丰富可改善TRPC1缺失诱导的记忆损伤,海马α-internexin和GMF-β蛋白是参与环境丰富改善TRPC1缺失诱导的记忆损伤过程的关键分子。
【关键词】：TRPC1 环境丰富 记忆损伤 荧光差异双向凝胶电泳
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R338
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 第一章 引言8-13
• 1.1 TRPC1背景介绍8
• 1.2 TRPC1调节Ca2+平衡8-9
• 1.3 TRPC1与成体神经发生9-10
• 1.4 环境丰富10-11
• 1.5 本课题的研究目的、意义与技术路线11-13
• 第二章 环境丰富改善TRPC1-/-小鼠记忆损伤13-21
• 2.1 引言13
• 2.2 实验材料13-14
• 2.3 实验方法14-15
• 2.4 结果15-19
• 2.5 讨论19-20
• 2.6 本章小结20-21
• 第三章 环境丰富对TRPC1-/-小鼠海马蛋白质组的影响21-48
• 3.1 引言21-22
• 3.2 实验材料22-25
• 3.3 实验方法25-31
• 3.4 结果31-46
• 3.5 讨论46-47
• 3.6 本章小结47-48
• 第四章 TRPC1缺失对小鼠脑神经细胞生存的影响48-62
• 4.1 引言48
• 4.2 实验材料48-49
• 4.3 实验方法49-55
• 4.4 结果55-57
• 4.5 讨论57-61
• 4.6 本章小结61-62
• 第五章 结论与展望62-64
• 5.1 结论62-63
• 5.2 展望63-64
• 参考文献64-71
• 附录71-72
• 硕士期间发表论文72-73
• 致谢73

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本文编号：495862