Gateway技术构建小鼠血管生成素-1慢病毒表达载体及其病毒包装

发布时间：2017-06-29 03:08

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【摘要】：目的构建携带小鼠血管生成素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装。方法利用Gateway技术构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5混合采用脂质体法制备DNA-Lipofectamine 2000复合物,并共同转染293FT细胞进行慢病毒包装,产生相应慢病毒颗粒,通过荧光表达情况来测定病毒滴度和感染效率。结果通过PCR、基因测序证实,Ang-1慢病毒表达载体PLV.Ex3d.P/puro-CMVAng-1IRES/DsRed-Express2构建成功。经转染293FT细胞包装出具高效感染力的慢病毒,经测定病毒滴度为5×108TU/ml。结论成功构建Ang-1慢病毒表达载体,并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为进一步研究Ang-1基因功能及基因治疗提供实验基础。
【作者单位】： 北京军区总医院(第二军医大学临床医学院)附属八一儿童医院;
【关键词】： 血管生成素- 慢病毒 载体 Gateway技术
【基金】：国家自然科学基金青年基金项目(No.81000265);国家自然科学基金项目(No.81270059)
【分类号】：R363
【正文快照】： 血管生成素(angiopoietin,Ang)是促进血管生成的最重要因子之一。迄今为止,共发现Ang-1、Ang-2、Ang-3和Ang-4,4种Ang家族成员,其受体分别为Tie-1及Tie-2,其中Ang-1与Tie-2是研究较早的Ang家族成员。研究表明,Ang-1可促进血管重塑,维持血管成熟稳定,并具有降低血管通透性和抗

【共引文献】

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本文编号：496304