人组蛋白H3真核表达载体的构建及功能初步检测

发布时间：2017-06-29 07:00

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【摘要】：目的构建带myc标签的人组蛋白H3基因真核表达载体,获得Myc-H3融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测。方法采用PCR技术从乳腺文库中扩增人H3基因编码序列,将其正确插入pXJ-40-myc载体,重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western blot法检测融合蛋白表达,通过免疫共沉淀技术检测融合蛋白与已知结合蛋白组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶(LSD1)和组蛋白甲基转移酶(EZH2)的相互作用。结果构建得到组蛋白H3基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;经Western blot法检测,融合蛋白成功表达;免疫共沉淀检测证实Myc-H3融合蛋白可以和已知相互作用蛋白LSD1及EZH2相互作用。结论成功构建组蛋白H3真核表达载体,该融合蛋白正确表达。
【作者单位】： 解放军总医院第一附属医院肿瘤一科;军事医学科学院生物工程研究所;解放军总医院内分泌科;
【关键词】： 甲基化 H LSD EZH 相互作用
【基金】：国家自然科学基金(30872939,31100604)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 组蛋白是组成染色体的一种重要蛋白质,作为脱氧核糖核酸折叠时所依赖的线轴,在基因表达调控中发挥重要作用。现在已知的组蛋白有6种,分别为H1、H2A、H2B、H3、H4及古细菌组蛋白。作为该家族中重要成员之一的组蛋白H3,由于其结构中包含着一球状结构域与长的N端尾巴,是组成核小

【参考文献】

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【共引文献】

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【相似文献】

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本文编号：496908