miR-106bE靶向调控BMP2参与间充质干细胞成骨分化与体内骨形成

发布时间：2017-07-03 09:19

  本文关键词：miR-106bE靶向调控BMP2参与间充质干细胞成骨分化与体内骨形成

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【摘要】：目的:Micro RNA作为一类具有调节作用的小RNA分子,参与众多生理过程。BMP2蛋白在间充质干细胞(MSCs)成骨分化过程中发挥关键作用。本实验探讨了mi R-106b调控MSCs成骨分化及在小鼠糖皮质激素诱导的骨质疏松症(GIOP)骨形成中的作用机制。方法:实时定量PCR(micro RNA特异性探针法或EVA Green法)确定mi R-106b在成骨分化过程中的变化趋势及与成骨相关基因(RUNX2、ALP、OSTERIX、COL1A1)的相关性;生物信息学预测mi R-106b与BMP2的靶向性,利用mi R-106b mimic、mi R-106b inhibitor在MSCs过表达或缺失表达mi R-106b进而确定mi R-106b的功能;荧光素酶报告基因实验(Luciferase assay)与Western Blot检测micro RNA与骨形成蛋白2(BMP2)之间的靶点关系;使用慢病毒-mi R-106b inhibitor干预小鼠糖皮质激素诱导的骨质疏松症(GIOP);采用组织化学和micro-CT分析mi R-106b inhibitor对GIOP的影响;在m RNA和蛋白质水平检测骨形成和骨吸收相关的指标及BMP2/SMAD信号通路涉及的分子;结果:实时定量PCR结果表明,mi R-106b在成骨分化过程中表达水平降低;过表达mi R-106b抑制MSCs成骨分化;在Luciferase assay中,结果显示mimic共转染组荧光值低于对照组,靶点突变后该效应逆转;q RT-PCR和Western Blot实验结果表明转染mi R-106b过表达降低BMP2 m RNA和蛋白质水平,inhibitor则产生相反的效果;干预GIOP的实验中,mi R-106b inhibitor能够增加骨质量、提高成骨细胞数目、骨形成率,提高血清中PINP的水平,同时增加BMP2、SMAD1和SMAD5m RNA的表达水平。此外,mi R-106b inhibitor还降低了血清中CTx-1的水平。结论:在MSCs成骨分化过程中,mi R-106b靶向结合BMP2 3’UTR序列并抑制BMP2基因的表达,进而抑制MSCs的成骨分化。在C57BL/6小鼠中抑制mi R-106b表达可以活化BMP2/SMAD信号通路,促进骨形成,从而缓解糖皮质激素诱导的骨质疏松症。
【关键词】：间充质干细胞 骨形态发生蛋白2 miR-106b 成骨分化 骨质疏松症
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-23
• 1.引言9
• 2. MicroRNA的产生及其发挥功能的机制9-10
• 3. 成骨细胞分化相关的信号通路及其相关的microRNA调控10-15
• 4. 总结15-16
• 参考文献16-23
• 第一部分：间充质干细胞成骨分化过程中microRNA的变化23-33
• 1. 材料与仪器23
• 2. 实验方法23-27
• 3. 实验结果27-31
• 4. 讨论31-32
• 参考文献32-33
• 第二部分： miR-106b对PMSCs成骨分化的影响33-45
• 1. 材料33-34
• 2. 实验方法34-39
• 3. 实验结果39-42
• 4. 讨论42-44
• 参考文献44-45
• 第三部分： miR-106b体内低表达缓解小鼠糖皮质激素诱导的骨质疏松症45-58
• 1. 材料45-46
• 2. 实验方法46-50
• 3. 实验结果50-55
• 4. 讨论55-56
• 参考文献56-58
• 总结与展望58-59
• 课题资助59-60
• 硕士研究期间完成的论文60-61
• 中英文对照缩词表61-62
• 致谢62-64

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9 李R既，

本文编号：513117