牛胚胎骨骼肌卫星细胞的分离、培养及诱导分化

发布时间：2017-07-03 13:21

本文关键词：牛胚胎骨骼肌卫星细胞的分离、培养及诱导分化

【摘要】：目的分离培养鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞,并研究其生物学特性。方法取30~50 d龄鲁西黄牛胚胎四肢骨骼肌,联合Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶及差速贴壁法分离获得骨骼肌卫星细胞,通过免疫细胞化学染色和RT-PCR检测卫星细胞表面标志desmin、MyoD、c-Met、Myf5、pax7,并研究其生物学特性。结果鲁西黄牛卫星细胞传代培养至15代以上,冻存后细胞活率为97.90%±0.96%;免疫细胞化学染色检测卫星细胞标记物desmin,MyoD呈阳性表达;RT-PCR检测desmin、c-Met、Myf5、pax7呈阳性表达;克隆形成率为56.39%±1.41%;染色体核型分析显示分离培养的细胞均来源于正常牛胚胎个体;通过不同的诱导剂将牛卫星细胞成功地诱导为成骨细胞和神经元样细胞,分别进行茜素红,甲苯胺蓝染色呈阳性表达,RT-PCR检测成骨细胞标记物osteopontin,Ⅰ型胶原蛋白和神经细胞标记物MAP2和nestin均呈阳性表达。结论本试验成功地分离获得了牛卫星细胞,并具有自我更新增殖和多向分化潜能。
【作者单位】：内蒙古农业大学兽医学院;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;
【关键词】： 鲁西黄牛胚胎 骨骼肌卫星细胞 增殖能力 诱导分化
【基金】：转基因生物新品种培育科技重大专项(2011ZX08009-003-006;2011ZX08012-002-06) 基本科研业务项目(2012z1072) 国家家养动物种质资源平台项目(2012年)
【分类号】：R329
【正文快照】： 骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SC)是具有增殖、自我更新和多向分化潜能的多能干细胞,最早由Mauro等[1]在蛙骨骼肌中发现。卫星细胞来源广泛,在体外具有较强的增殖能力及适应能力,在异体移植中免疫原性低,免疫排斥反应低,移植后存活时间长,因此在骨骼肌的损

【参考文献】

中国期刊全文数据库前1条

1 李方华;侯玲玲;马月辉;庞全海;关伟军;;北京油鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养、鉴定及成肌诱导分化的研究[J];中国农业科学;2010年22期

【共引文献】

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1 兴孝友;佟慧丽;李树峰;严云勤;;牛骨骼肌卫星细胞的分离培养及诱导分化方法的建立[J];黑龙江畜牧兽医;2012年11期

2 边艳超;牧仁;李向臣;李云章;关伟军;;鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞分离培养及生物学特性[J];华中农业大学学报;2013年02期

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【二级参考文献】

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1 吴常信;动物遗传资源保存的理论与技术──21世纪动物农业持续发展的种质基础[J];云南大学学报(自然科学版);1999年S3期

【相似文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 董少红;张鹏;温隽珉;高虹;庞新利;;酸性成纤维细胞生长因子促进兔骨骼肌卫星细胞生长的研究[J];中华医学杂志;2007年17期