蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1原核表达载体的构建

发布时间：2017-07-03 18:06

  本文关键词：蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1原核表达载体的构建

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【摘要】：目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。将重组后质粒pEASYTM-E1-NS1转化至BL21细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后进行镍离子亲和纯化,利用Bradford法测定蛋白浓度。采用SDS-PAGE和Western blotting法分析融合蛋白的表达水平。结果:含TBEV NS1的原核表达载体pEASYTM-E1-NS1经诱导后,可获得以包涵体形式存在的融合蛋白,通过亲和纯化得到较高纯度的蛋白质。SDS-PAGE和Western blotting,在相对分子质量约40 000处有特异性蛋白条带。结论:成功构建重组pEASYTM-E1-NS1原核表达载体,获得高纯度的重组TBEV NS1的融合蛋白。
【作者单位】： 吉林大学白求恩医学院;吉林大学白求恩医学院病原生物学系;
【关键词】： 蜱传森林脑炎病毒 非结构蛋白 原核表达 融合蛋白
【基金】：国家自然科学基金资助课题(69301261)
【分类号】：R373
【正文快照】： 蜱传森林脑炎病毒(Tick-borne encephalitisvirus,TBEV)是黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)成员,TBEV引起的脑炎又称森林脑炎,主要流行于欧洲和亚洲[1],在我国主要分布于东北地区,在云南、新疆和西藏也有自然疫源地存在的报道[2]。人感染TBEV后可引起发热、头痛、

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