siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响

发布时间：2017-07-07 18:23

  本文关键词：siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响

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【摘要】：目的构建Notch3基因的siRNA真核表达载体,探讨其对大鼠耳蜗前体细胞中Notch3基因表达的影响。方法机械分离并胰酶消化新生大鼠耳蜗感觉上皮,悬浮培养基培养耳蜗前体细胞。根据Notch3基因序列设计并合成2对siRNA,插入pSilencer4.1-CMV neo载体,进行酶切及测序鉴定。采用脂质体法向大鼠耳蜗前体细胞转染重组质粒,采用Real time-PCR和Western blotting法检测重组质粒对Notch3基因的干扰效果。结果经前体细胞标记物Abcg2染色鉴定证实原代培养的细胞球为耳蜗前体细胞。酶切及测序鉴定证实成功构建了siRNA真核表达载体pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示所构建的Notch3基因真核表达载体成功地干扰了目的基因的表达。与空白对照组比较,转染pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2的细胞Notch 3 mRNA和蛋白表达量均有明显减少,而转染空质粒的细胞与空白对照组比较无显著差异。结论成功构建了大鼠Notch3基因的RNAi真核表达载体,该载体在大鼠耳蜗前体细胞中对Notch3基因的表达可发挥抑制作用。
【作者单位】： 西安交通大学第二附属医院耳鼻喉科;
【关键词】： Notch 小分子干扰 耳蜗 前体细胞
【基金】：国家自然科学基金(30973300)~~
【分类号】：R329.492
【正文快照】： 感音神经性聋严重影响着人们的健康和生存质量,其主要病变部位位于耳蜗毛细胞和螺旋神经元[1]。近年研究发现,新生哺乳动物耳蜗中存在一定数量的具有成体干细胞特点的前体细胞,是细胞移植治疗感音神经性聋极佳的种子细胞[2-4]。Notch370解放军医学杂志2013年5月1日第38卷第5

【二级参考文献】

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本文编号：531341