胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立

发布时间：2017-07-16 20:24

  本文关键词：胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立

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【摘要】：目的获得胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管共培养的条件,在体外建立稳定的神经-肌肉共培养体系,并形成功能性的神经肌肉接头。方法 C2C12成肌细胞株体外扩增培养至60%~70%融合时,用分化培养液诱导分化;取孕15~16d的SD大鼠,提取胚胎大鼠脊髓前角运动神经元细胞,种植到分化5d的C2C12肌管细胞中,在神经元基础无血清培养液Neurobasal+2%B27中共培养。倒置显微镜下观察各个阶段神经元形态及突起长度的变化、肌管形态变化及收缩特性、神经肌肉接头的形成,应用免疫荧光染色技术检测突触后膜乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)特异性结合物α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BTX),并采用屏幕录像技术记录共培养体系中肌肉收缩现象。结果在共培养体系中,原代脊髓运动神经元与C2C12肌管细胞均能存活并进一步分化成熟。3d时,可见运动神经元伸出的轴突延伸至肌管膜表面或包绕肌管;1周时,肌管按同一方向排列,出现广泛的节律性收缩,同时免疫荧光染色结果显示α-BTX特异性结合突触后膜AChR;共培养10d后,运动神经元开始凋亡,肌管细胞逐渐出现萎缩现象。结论在体外培养条件下,无需特殊培养基和各种营养因子,运动神经元和骨骼肌细胞即可共同生存、生长并进一步发育,建立突触连接,触发一系列神经肌肉接头信号转导,引发肌管节律性收缩。
【作者单位】： 第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科;
【关键词】： 运动神经元 成肌细胞 肌收缩 共同培养技术 神经肌肉接头
【基金】：国家自然科学基金(81070775)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 细胞共培养技术可以更好地模仿体内的环境,在体外建立适当的细胞共培养模型对于观察多种细胞之间或两种细胞之间的相互作用、了解细胞培养所需的条件及环境要求、探讨药物的作用机制和药物可能作用的靶点、弥补单层细胞培养和整体动物实验的缺陷等众多方面都有着重要意义[1]。

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本文编号：550437