哺乳动物细胞中EB病毒诱导基因3的定位及表达

发布时间：2017-07-18 01:28

  本文关键词：哺乳动物细胞中EB病毒诱导基因3的定位及表达

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【摘要】：目的构建带有FLAG-tag的人野生型EB病毒诱导基因3(EBI3)真核表达载体,用其转染COS-7和HEK 293T细胞,观察EBI3在哺乳动物细胞中的定位和表达情况。方法设计带有FLAG-tag的引物,以含人EBI3全长cDNA序列的质粒为模板,以PCR方法扩增出EBI3全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中,构建pCDNA3.1-EBI3-FLAG质粒。将重组质粒转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察其在胞内的定位情况;转染至HEK 293T细胞,提取细胞总蛋白进行Western blot。结果正确构建pCDNA3.1-EBI3-FLAG质粒;荧光定位实验表明在COS-7细胞中,EBI3蛋白主要分布在细胞质中,且较集中分布于靠近核膜的位置。Western blot结果表明该质粒能在细胞中有效表达。结论 EBI3在COS-7细胞中有表达,且主要分布在胞质内,该研究结果为了解EBI3在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能奠定了一定基础。
【作者单位】： 安徽医科大学生命科学院生物学教研室;
【关键词】： EBI 免疫荧光 细胞定位 转染
【基金】：安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187) 安徽省自然科学基金(编号:11040606M170、11040606M164)
【分类号】：R392
【正文快照】： EB病毒诱导基因3(epstein-barr virus-inducedgene3,EBI3)蛋白最初是在受EB病毒感染的B淋巴细胞表达产物中发现的,与白介素(IL)-12 p40亚基同源[1],是一种分泌型糖蛋白,属于造血因子受体家族[2]。EBI3的基因定位于19p13.3,其cDNA全长650个碱基对,编码含220个氨基酸的EBI3蛋白

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