感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制

发布时间：2017-07-19 18:14

  本文关键词：感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制

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【摘要】：目的了解感染人巨噬细胞过程中间号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。 方法采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域。采用实时荧光定量RT-PCR检测钩体感染人THP-1巨噬细胞前后钩体主要OMP编码基因mRNA水平的变化。采用HK胞外区多肽抗血清封闭试验及氯氰碘柳胺阻断试验,检测OmpR及其HK对感染过程中问号钩体OMP编码基因mRNA水平变化的影响。 结果生物信息学分析结果显示,LB015和LB333可能是问号钩体赖株OmpR编码基因,LB014可能是其HK编码基因。问号钩体赖株感染THP-1细胞后,lipL21、 lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持续下降(P0.01), groEL、mce、loa22、 ligB基因mRNA水平瞬时迅速升高(P0.01)。氯氰碘柳胺或HK抗血清处理可使感染THP-1细胞而显著下降的问号钩体lipL21和lipL48基因mRNA水平明显回升(P0.01),氯氰碘柳胺处理可使感染THP-1细胞而显著升高的groEL、mce、 loa22、ligB基因mRNA水平明显下降(P0.01)。 结论问号钩体赖株感染人巨噬细胞后主要OMP抗原表达水平发生明显变化。问号钩体赖株染色体中存在一组编码OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下调感染过程中部分OMP抗原表达水平。
【关键词】：问号钩端螺旋体 感染 外膜蛋白 表达 OmpR 氯氰碘柳胺
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 致谢5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-12
• 1 引言12-14
• 2 材料和方法14-33
• 2.1 主要试剂和来源14-15
• 2.2 主要溶液、培养基配制15-16
• 2.3 主要仪器设备16
• 2.4 细胞株及培养16-17
• 2.5 细菌株及培养17
• 2.6 实验动物17
• 2.7 OmpR及其相关HK基因预测与结构分析17-18
• 2.8 多肽合成18
• 2.9 抗血清制备18
• 2.10 ELISA测定抗血清效价18-19
• 2.11 钩体感染细胞模型19
• 2.12 OmpR相关HK封闭试验19-20
• 2.13 氯氰碘柳胺阻断试验20
• 2.14 钩体总RNA的提取及cDNA合成20-22
• 2.15 靶基因mRNA水平检测22-25
• 2.16 统计学方法25
• 2.17 OmpR及其相关HK基因的克隆及其原核表达25-28
• 2.18 自杀质粒的构建28-33
• 3 结果33-43
• 3.1 OmpR基因预测和分析结果33-34
• 3.2 HK基因预测和分析34-35
• 3.3 LB014-胞外多肽抗血清制备及其效价测定35
• 3.4 感染细胞前后钩体TCSS基因mRNA水平变化35-38
• 3.5 感染后mRNA水平下调或无明显变化的OMP编码基因38-40
• 3.6 感染后mRNA水平上调的OMP编码基因40-41
• 3.7 自杀质粒的构建41
• 3.8 OmpR及其相关HK基因的克隆及其原核表达41-43
• 4 讨论43-46
• 5 结论46-47
• 6 参考文献47-52
• 综述52-59
• 参考文献56-59
• 作者简历及在读研期间所取得的科研成果59

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