弓形虫棒状体蛋白ROP18的原核表达及其免疫保护性研究

发布时间：2017-07-25 22:22

  本文关键词：弓形虫棒状体蛋白ROP18的原核表达及其免疫保护性研究

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【摘要】：目的克隆弓形虫ROP18基因并构建该基因的原核表达系统。方法根据GenBank发表的弓形虫ROP18序列设计合成1对特异性引物,PCR扩增ROP18抗原基因,并亚克隆到pET-28a原核表达载体,重组质粒转入大肠埃希菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达,重组蛋白用SDS-PAGE及Western blot鉴定。重组蛋白经纯化后免疫小鼠,ELISA法检测血清抗弓形虫IgG,并通过攻虫试验观察重组蛋白的免疫保护作用。结果成功构建了ROP18基因原核表达质粒pET-28a-ROP18,表达重组蛋白的分子质量单位约为55ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫多抗血清识别;经ELISA检测,重组蛋白免疫小鼠产生了较高水平的血清抗体;攻虫试验中,重组蛋白免疫小鼠生存时间较对照组小鼠显著延长(P0.05)。结论成功构建了ROP18基因原核表达质粒,表达的重组蛋白具有一定的免疫保护作用。
【作者单位】： 吉林农业大学生命科学学院;军事医学科学院军事兽医研究所 吉林省人畜共患病预防与控制重点实验室;军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人畜共患病预防与控制重点实验室;吉林省畜牧兽医科学研究院;
【关键词】： 弓形虫 ROP 原核表达
【基金】：国家自然科学基金项目(No.30972178,31072127,31001057)
【分类号】：R392
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布、专性细胞内寄生的机会性致病原虫[1],可感染包括哺乳动物及鸟类在内的几乎所有温血脊椎动物,据估计全世界有超过三分之一的人感染过弓形虫[2]。一般情况下,宿主呈隐性感染,但在免疫缺陷病人群(如艾滋病和器官移植患者)弓形

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本文编号：573612