模拟水样中甲型肝炎病毒浓缩方法的比较研究

发布时间：2017-07-26 12:23

  本文关键词：模拟水样中甲型肝炎病毒浓缩方法的比较研究

  更多相关文章： 甲型肝炎病毒 浓缩方法 PEG沉淀 直接裂解 超滤

【摘要】：甲型肝炎是由甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus, HAV)引起的急性传染病,感染者可能出现黄疸、发热、厌食、恶心、呕吐、头疼和乏力等症状。HAV主要通过粪口途径传播,有六种基因型,仅有一个血清型,水源性或食源性甲肝爆发危害人类的健康,因此检测食物或水中的HAV对食品安全或饮用水安全具有重要意义。由于环境水体中HAV的含量较少,直接检测比较困难,细胞培养HAV耗费时间较长,病毒滴度较低,因此,选择一种合适的物理方法对水样中HAV进行富集浓缩显得很重要。本研究分两个部分：第一部分：比较两种阴阳离子滤膜对模拟水样中HAV浓缩效果采用Sartorius阳离子滤膜和Millipore阴离子滤膜过滤浓缩做为一步浓缩方法,聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)沉淀浓缩做为二步浓缩方法对模拟水样中的HAV进行浓缩,采用TaqMan real-time RT-PCR进行检测。以加入甲肝减毒活疫苗(Hepatitis A Attenuated Live Vaccine, HepA-L)的超纯水或矿泉水为模拟水样,以不加HepA-L的超纯水或矿泉水为阴性对照,采用SPSS21.0统计软件,用T检验的方法对两种滤膜的浓缩效果进行统计学分析,结果表明两者无统计学差异(Ct值比较P=0.3740.05,病毒量比较P=0.3070.05)。选用Sartorius阳离子滤膜比较不同的滤膜洗脱方式：摇床清洗、涡流清洗、超声20min清洗、超声40min清洗、直接裂解的方法对滤膜进行洗脱处理,结合PEG沉淀二步浓缩对模拟水样进行浓缩,提取核酸后采用[aqMan Real-Time RT-PCR检测,采用SPSS21.0统计软件,用方差分析的方法对不同的膜洗脱方式浓缩后的Ct值及病毒回收量进行统计学分析比较,结果表明这几种洗脱方式有统计学差异(Ct值整体比较P=0.0000.05,病毒量整体比较P=0.0000.05)。两两比较结果表明直接裂解的方式与其他几种方式均具有统计学差异,且回收率均值高于其他几种方法,回收率为68.17±16.79%。选用Millipore阴离子滤膜和Sartorius阳离子滤膜用直接裂解的方式对滤膜进行处理,以加入HepA-L的超纯水或矿泉水为模拟水样,浓度分别为0.2TCIDso/m1,1 TCIDso/ml,5 TCIDso/ml,以不加HepA-L的超纯水或矿泉水为阴性对照,将浓缩后所得Ct值及病毒量进行统计学分析,结果显示两种滤膜在低病毒浓度时(0.2 TCID50/ml),其回收效率能达到70%以上；两种模拟矿泉水与相同病毒量的模拟超纯水样中的病毒回收量进行方差分析比较,结果显示三者没有统计学差异(P=0.9500.05),回收率均值大小显示这三种水质浓缩效果相当。小结：本实验结果表明Millipore阴离子滤膜和Sartorius阳离子滤膜在一定病毒量浓度时,两种滤膜的浓缩效果没有统计学差异；比较的几种不同的膜洗脱方式浓缩效果有差异,其中直接裂解的方式浓缩效果优于其他几种方式；比较的不同浓度模拟病毒水样中,两种滤膜在低病毒浓度时回收效果均能达到较高的水平,比较的三种水质的浓缩效果没有统计学差异。本研究结果为后续水体中HAV浓缩方法的优化提供一定的实验依据。第二部分：模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和PEG浓缩方法的比较为比较模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和PEG浓缩方法,向模拟水样中接种已知量的甲肝病毒,分别选用Millipore和Sartorius公司的100KD和50KD孔径的微孔超滤管及终浓度为10%聚乙二醇(PEG)-1M氯化钠(NaCl)沉淀的方法对模拟水样进行浓缩,采用荧光定量RT-PCR方法检测浓缩后的病毒量,用SPSS21.0对数据进行统计学分析。结果显示同一孔径不同厂家的超滤管浓缩病毒无统计学差异(P=0.25,P=0.532),对浓缩后的Ct值及回收量进行分组比较,结果均表明不同处理方法有统计学差异(P=0.0000.05,P=0.0000.05),其中50KD组浓缩病毒回收率为(94.57±16.26%),100KD组浓缩病毒回收率为(52.37±14.75%),10%PEG-1.0MNaCl沉淀病毒回收效率为(63.5±8.45%)。小结：超滤和PEG沉淀两种方法均可用于水样中HAV浓缩,超滤管浓缩病毒操作简便,耗时更短,选择合适孔径可以提高HAV病毒回收率,本实验中50KD超滤管HAV回收率高于100KD:PEG更适用处理大体积样本。综上所述,本研究结果表明Millipore阴离子滤膜和Sartorius阳离子滤膜均可用于水中HAV的浓缩,在一定病毒浓度时,两种滤膜的浓缩效果差异无统计学意义,Sartorius阳离子滤膜操作更为简单；直接裂解的洗脱方式浓缩效果优于其他几种方式；本实验比较的三种水质的浓缩效果差异没有统计学意义。超滤和PEG沉淀两种方法均可用于水样中HAV浓缩,超滤管浓缩病毒操作简便,耗时更短,选择合适孔径可以提高HAV病毒回收率,本实验中50KD超滤管HAV回收率高于100KD:PEG更适用处理大体积样本。
【关键词】：甲型肝炎病毒 浓缩方法 PEG沉淀 直接裂解 超滤
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 第一部分 比较两种阴阳离子滤膜对模拟水样中HAV浓缩效果13-41
• 前言13-16
• 1. 实验材料16-18
• 2. 实验方法18-25
• 3. 实验结果25-38
• 4. 实验讨论38-40
• 小结40-41
• 第二部分 模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和PEG浓缩方法的比较41-51
• 前言41
• 1. 实验材料41-42
• 2. 实验方法42-47
• 3. 实验结果47-50
• 4. 实验讨论50-51
• 小结51
• 全文总结51-52
• 参考文献52-54
• 综述：甲型肝炎病毒水体浓缩方法54-63
• 参考文献60-63
• 致谢63

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 于芳,张正光,郭智霞,胥照平;重组人尿激酶原纯化中浓缩方法的比较[J];生物技术通讯;1998年04期

2 盘宝进;刘军义;韦梅良;;水体病毒浓缩方法的建立和优化研究[J];微生物学通报;2005年06期

3 高桥里次 ,金其荣;含有赖氨酸溶液的浓缩方法[J];氨基酸杂志;1983年02期

4 陈因;;介绍两种简便的生化样品浓缩方法[J];植物生理学通讯;1982年01期

5 王晓辉;龙润乡;张名;杨晓蕾;梁海孝;张云昆;邵聪文;;HAV病毒液的3种浓缩方法比较[J];现代生物医学进展;2014年24期

6 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 肖文军;刘仲华;龚志华;;茶叶深加工中浓缩技术研究[A];中国茶叶学会成立四十周年庆祝大会暨2004年学术年会论文集[C];2004年

2 徐露;李金娟;欧阳雅博;金敏;谌志强;邱志刚;王景峰;陈照立;王新为;李君文;;三种水体中病毒浓缩方法效果比较[A];2011年全国环境卫生学术年会论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 张明;蜂蜜的浓缩方法[N];农民日报;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 赵霖;模拟水样中甲型肝炎病毒浓缩方法的比较研究[D];中国疾病预防控制中心;2016年

，

本文编号：576383