人前蛋白转化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2017-07-29 22:18

  本文关键词：人前蛋白转化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表达及多克隆抗体的制备

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【摘要】：目的构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体并诱导其表达,制备其蛋白的多克隆抗体。方法聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列;扩增产物经TA克隆、双酶切、连接,构建pET-28b-pcsk9表达载体;将重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)的感受态细胞中,诱导表达;用纯化检测过的目的蛋白免疫新西兰兔,最后采集全血收集血清,获得多克隆抗体,并对该抗体进行免疫印迹及效价测定。结果 PET-28b-pcsk9原核表达载体构建成功,用诱导表达的目的蛋白免疫动物,收集血清获得多克隆抗体。对多克隆抗体进行纯化,免疫印迹检测结果证明自制多克隆抗体特异性良好,效价测定为1:13 200。结论成功构建了pcsk9原核表达载体pET-28b-pcsk9,且获得了其蛋白的多克隆抗体。
【作者单位】： 广州医科大学第一附属医院检验科;
【关键词】： pcsk 表达载体 诱导表达 多克隆抗体
【基金】：广州市教育局市属高校科研项目(10A259) 广州市属高校教学团队项目(穗教高教2012-16号)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 高胆固醇血症是目前威胁现代人类健康的一大疾病,是环境、遗传等多因素相互作用引起的复杂性疾病⑴。血浆中低密度脂蛋白胆固醇(low densitylipoprptein cholesterol,LDL-C)水平的异常升高是其发生的最主要原因,所以合理地控制LDL-C的血浆水平则是预防和治疗此病的关键所在。

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2 王选锭;章锐锋;翁宏飚;牛宝龙;;金黄色葡萄球菌RAP重组蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌的表达[A];中华医院管理学会第十届全国医院感染管理学术年会论文汇编[C];2003年

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5 吴红联;;5-脂氧化酶基因真核表达载体的构建与鉴定[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年

6 程飚;刘宏伟;唐建兵;朱江婷;彭艳;项晓飞;;MOR、DOR和KOR基因干扰RNA表达载体的构建[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年

7 徐哲;黄长形;李羽;王平忠;任广立;贾战生;孙永涛;聂青和;白雪帆;;TLR4 siRNA表达载体的构建及其在体外对RAW264．7细胞TLR4的抑制效果[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年

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9 方六荣;肖少波;谢京国;潘永飞;姚林;陈焕春;;基于SFV复制子的“自杀性"DNA疫苗载体的构建及其体外表达特性[A];湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编[C];2004年

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