应用磁性分选方法从人脐血中分离极小类胚胎干细胞

发布时间：2017-08-01 09:15

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【摘要】：目的建立从人脐血中分离极小类胚胎干细胞的磁性分选方法。方法脐带血标本与0.9%生理盐水以1∶1充分混匀,形成单细胞悬液层加到比重为1.077 g/mL的淋巴细胞分离液上,经密度梯度离心收集单个核细胞层。应用Lineage Cell Depletion Kit、CD45 MicroBeads、CD133 MicroBead Kit和CD34 MicroBead Kit进行磁性分选。应用流式细胞术分别检测分选的细胞群的表面标志。利用兔抗人Oct4与Nanog单克隆抗体和鼠抗兔IgG二抗分别检测分选细胞核内Oct-4和Nanog表达。RT-PCR检测分选细胞的Oct-4和Nanog mRNA表达。通过与人正常红细胞比较分析细胞大小。结果磁性分选获得Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+这2群细胞。免疫荧光法检测显示这2群细胞中均表达Oct-4和Nanog。RQ-PCR结果显示2群细胞均表达Oct-4和Nanog转录子。瑞氏染色镜下可见Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+这2群细胞大小比正常红细胞小,且核质比高。结论应用磁性分选方法可获得表达Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+的极小类胚胎干细胞。
【作者单位】： 浙江省血液中心卫生部血液安全研究重点实验室;
【关键词】： 极小类胚胎干细胞 脐血 磁性分选
【基金】：浙江省医药卫生科学研究基金(2011RCA018)
【分类号】：R329
【正文快照】： 干细胞是1类具有全能分化增殖能力的细胞,理论上干细胞可以通过体外增殖分化产生多系成熟功能细胞,显示了良好的应用前景。新近研究发现人体内存在1种极小类胚胎干细胞(very small embryonic-like stem cells,VSELs),可表达胚胎转录因子Oct-4和Nanog,具有胚胎干细胞(ESC)无限

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1 何秉燕,陈冬珍,张渝侯,许家琪,刘茜;重组人肿瘤坏死因子协同脐血CD_3AK细胞诱导K562细胞凋亡的实验研究[J];中华血液学杂志;2002年02期

2 黎阳,包蓉,黄绍良,吴燕峰,魏菁,周敦华;诱导脐血单个核细胞分化为树突状细胞的实验研究[J];中国当代儿科杂志;2004年05期

3 孙莉，罗朝东;人类造血干细胞的胚胎发育及脐血造血干细胞的研究进展[J];解剖科学进展;1996年02期

4 李晓玲,王爱华,高英敏;不同海拔高度脐血蛋白、糖浓度与新生儿体重的关系[J];现代妇产科进展;1997年02期

5 李明辉,田丁;脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2003年01期

6 张芳婷,房家智,朱萍,叶静,于洁;脐血CD34~+细胞的分离与纯化[J];现代检验医学杂志;2004年02期

7 顾淑珠,朱建民,高建军,王洪复;脐血单核细胞向破骨细胞诱导分化的实验研究[J];复旦学报(医学版);2005年03期

8 梁辉,黄未未,王耀平,应大明;6种细胞因子对脐血的CFC和LTC-IC的刺激作用[J];中华血液学杂志;1996年02期

9 裴雪涛,王立生,徐黎,吴祖泽;脐血 CD_(34)~+ 细胞扩增和改善其移植效率的实验研究[J];中华血液学杂志;1997年03期

10 王红卫;脐血免疫细胞与脐血干细胞移植的关系[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1999年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 谢梅林;吴银根;顾振纶;;脐血嗜碱粒细胞表达HLA-Ⅱ类分子的研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第二部分）[C];2002年

2 郑晓东;魏海明;田志刚;;IL-2与IL-5对脐血NK前体细胞的促分化作用的初步比较[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

3 王钦红;谢毅;;SiRNA干扰p27基因表达对脐血CD34~+细胞体外扩增影响的初步研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

4 王亚非;李茜;孟恒星;于珍;刘津华;崔雯;周余;麦玉洁;尤胜国;邱录贵;;两步法从脐血CD_(34)~+细胞获得大量树突状细胞的初步研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年

5 曾彦;刘霆;李胜富;孟文彤;汪宇春;刘兴会;陈强;;仿生成骨细胞龛和血管内皮细胞龛对脐血CD34+细胞支持作用的对比研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

6 苗振川;王承艳;丰美福;;脐血来源的间充质细胞支持造血作用的研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年

7 姜尔烈;黄勇;王荷花;刘庆国;周世勇;何棉;王志东;王玫;周征;翟文静;韩明哲;;间充质干细胞对脐血造血干细胞扩增的支持作用[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

8 冯义;肖志坚;徐世才;卢士红;刘斌;刘津华;韩忠朝;;脐血巨核祖细胞体外扩增的研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

9 张毅;李长东;江小霞;刘元林;张双喜;吴英;唐佩弦;毛宁;;胎盘间充质干细胞的分离及对脐血CD_(34)~+细胞的体外扩增作用[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年

10 戴宏;刘玉龙;姜忠;周丽英;胡勤芳;郭晓葵;周剑影;;细胞因子对脐血AC133~+细胞表面趋化因子受体和粘附分子及辐射损伤的修复调节作用[A];全国医用辐射防护与安全学术研讨会论文汇编[C];2004年

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1 记者 熊学莉　通讯员 吴刘佳 张晨光;脐血基质细胞可辅助重建造血功能[N];健康报;2011年

2 沈敏;收集捐献宝宝脐带血,或可救人一命[N];新华每日电讯;2010年

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4 仇逸;“接种”母亲干细胞 9岁男孩重焕生机[N];医药经济报;2000年

5 本报记者 聂国春　整理;脐带血,存还是捐？[N];中国消费者报;2010年

6 王淑君　马浩剑;我市正式进军干细胞研究治疗[N];常州日报;2011年

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1 黄景玲;脐血间充质干细胞修复心肌的研究和干细胞临床应用[D];兰州大学;2010年

2 李长东;人胎盘间充质干细胞的分离鉴定及其对脐血造血干/祖细胞体外扩增的支持作用[D];吉林大学;2004年

3 赵书平;PSC3445细胞——人脐血中一种新的成体干细胞[D];第二军医大学;2004年

4 田新;脐血及脐带静脉内皮下间充质干细胞的分离扩增与分化[D];四川大学;2007年

5 吴明媛;脐血衍生的树突状细胞体外诱导调节因素及其生物学功能研究[D];苏州大学;2005年

6 陶月红;维生素A对树突状细胞的调节及其在粘膜免疫中的作用[D];复旦大学;2006年

7 邓黎;人脐血间充质干细胞成肌分化及对尿道括约肌功能影响的实验研究[D];第三军医大学;2007年

8 王雪野;CD4~+CD25~+调节性T细胞与疾病相关性及其体外扩增的实验研究[D];吉林大学;2009年

9 王韫芳;骨髓/脐血来源的成体干细胞在肝脏再生医学中应用的基础研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

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1 徐建萍;脐血造血干细胞体外分化为内皮细胞的实验研究[D];福建医科大学;2004年

2 费小明;脐血造血干细胞的体外扩增[D];南京医科大学;2003年

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4 蔡伟波;低剂量辐射对脐血的刺激效应及其临床意义研究[D];苏州大学;2001年

5 程瑞芳;来源于脐血与骨髓中间充质干细胞和造血干细胞的比较[D];天津医科大学;2004年

6 高燕平;脐血干细胞的分离，，玻璃化冻存和活率检测研究[D];浙江大学;2002年

7 景强;脐血造血细胞体外扩增的研究[D];南京工业大学;2004年

8 鲍春雨;脐血造血干/祖细胞体外扩增及无血清培养的实验研究[D];大连医科大学;2004年

9 张冬清;增殖细胞核抗原在脐血CD34～+造血干/祖细胞中的表达及意义[D];汕头大学;2004年

10 王丽娟;人脐血间充质干细胞饲养层对造血干/祖细胞扩增的支持及其向软骨细胞方向的诱导[D];浙江大学;2004年

本文编号：603531