原癌基因c-myc真核表达载体构建及其生物学作用

发布时间：2017-08-01 11:10

  本文关键词：原癌基因c-myc真核表达载体构建及其生物学作用

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【摘要】：目的利用基因工程技术构建携带原癌基因c-myc的真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc重组质粒并在Hela细胞中表达。方法以构建好的表达质粒pET28a-c-myc为基础,利用PCR方法扩增c-myc基因,并加入EcoRⅠ和SmaⅠ酶切位点,克隆至pMD19-T Simple载体,双酶切后将其与同样经过双酶切的真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc连接,通过PCR、酶切及测序鉴定重组质粒的正确性,再将重组质粒pIRES2-AcGFPl-Nuc-c-myc转染Hela细胞,利用荧光显微镜观察GFP表达,利用MTT和免疫印迹证实c-myc蛋白表达量提高。结果经PCR和酶切鉴定与预期结果相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒。免疫印迹证实c-myc基因在Hela细胞中得到表达。MTT结果显示Hela细胞数量显著增加。结论真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc-c-myc成功构建,c-myc基因在Hela细胞中成功表达,具有生物学活性。
【作者单位】： 大连大学生命科学与技术学院基础生物学教研室;
【关键词】： c-myc pIRES-AcGFP-Nuc 载体构建
【基金】：国家自然科学基金(31202020)
【分类号】：R346
【正文快照】： Myc基因家族是较早发现的一组癌基因,包括c-myc、l-myc、n-myc、b-myc和s-myc等[1]。myc基因属于编码核蛋白的癌基因,通过其产物与核内DNA结合而实现对细胞周期的调控[2]。myc基因家族及其产物可促进细胞增殖,永生化,去分化和转化等,因此在多种肿瘤的形成过程中处于重要地位[3

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 金建丽;杨春文;金志民;安文和;;雷氏七鳃鳗LDH与SOD同工酶的电泳分析[J];安徽农业科学;2010年04期

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6 魏s，

本文编号：603929